植物组织培养培养基及操作技术VIP免费

第三章培养基及一般培养技术（4学时）3.1培养基的种类和成份（1学时）3.2培养基的制备（母液的配制和保存；MS培养基的配制）（融入实验课）；一般操作技术（灭菌、接种、培养、移栽驯化）（2学时）3.3组培常见问题与对策（污染、褐化、玻璃化）（1学时）第一节培养基的成分和种类一、培养基的成分1、无机营养元素(inorganicelement)1)大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元素。[N、P、K、Mg、S和Ca等]。2)微量元素：指小于0.5mmol／L的元素。[Fe，B，Mn，Cu，Mo，Cl等]。•在细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动。•种类：VBl(盐酸硫胺素)、VB6(盐酸吡哆醇)、Vpp(烟酸)、Vc（抗坏血酸）、VH(生物素)、VB11(叶酸)、VB12（钴胺素)等。•使用浓度：一般用量为0.1—1.0mg／L。22、维生素、维生素(vitamin)(vitamin)•又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。•使用浓度：一般为lOOmg／L，•作用：适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。33、肌醇、肌醇培养基及其配制•作用：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。•种类：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。•使用浓度：为10—200mg／L。44、氨基酸、氨基酸(aminoacid(aminoacid））培养基及其配制5、有机附加物（天然复合物）10%—20%10%—20%150-200ml150-200ml／／LL150—200g150—200g／／LL0.01%-0.05%0.01%-0.05%浓度浓度：：培养基及其配制6、植物生长调节物质(hormone)赤霉素（赤霉素（gibberellicacidgibberellicacid））细胞分裂素类细胞分裂素类(cytokinin)(cytokinin)生长素类生长素类(auxin)(auxin)培养基及其配制*作用：主要被用于诱导愈伤组织形成；促进细胞脱分化；促进细胞伸长；促进生根。在促进生长方面，根对生长素最敏感。在极低的浓度下，(10-5—10-8mg／L)就可促进生长，其次是茎和芽。（（11）生长素类）生长素类培养基及其配制吲哚乙酸：IAA（indoaceticacid）萘乙酸：NAA（naphthaleneaceticacid）吲哚丁酸：IBA（indolebutyricacid）2,4-二氯苯氧乙酸：2,4—D(2,4-dichlorophenoxybutyricacid)生长素种类：生长素种类：培养基及其配制生长素作用强弱顺序：IAA(吲哚乙酸)NAA(萘乙酸)IBA(吲哚丁酸)2,4—D(2,4—二氯苯氧乙酸)强弱培养基及其配制种类：•6—BA(6—苄基腺嘌呤)•Kt(kinetin激动素)•Zt(zeatin玉米素)（（22）细胞分裂素类）细胞分裂素类细胞分裂素作用：细胞分裂素作用：①①促进细胞分裂与扩大。促进细胞分裂与扩大。②②诱导芽分化，促进侧芽萌发，使茎增粗，抑制茎伸长。诱导芽分化，促进侧芽萌发，使茎增粗，抑制茎伸长。③③抑制根的分化抑制根的分化。。培养基及其配制细胞分裂素作用强弱顺序Kt(激动素)6—BA(6—苄基腺嘌呤)Zt(玉米素)强弱培养基及其配制GA3（赤霉酸）：作用：促进幼芽伸长生长，促进不定胚发育成小植株。赤霉素和生长素协同作用，对形成层的分化有影响：当生长素／赤霉素比值高时有利于木质部分化，比值低时有利于韧皮部分化。（（33）赤霉素）赤霉素培养基及其配制7、培养材料的支持物---琼脂(agar)•固体培养时最好的固化剂。•用量：6—10g／L。•琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何营养。琼脂能溶解在热水中，成为溶胶，冷却至40℃即凝固为固体状凝胶。•琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工方式有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水解，丧失凝固能力。时间过久，琼脂变褐，也会逐渐丧失凝固能力。培养基及其配制固体培养基的特点（与液体培养基相比）:优点:操作简便，通气问题易解决，便于观察研究。缺点:培养物与培养基的接触(即吸收)面积小，各种养分在琼脂中扩散较慢，影响养分充分利用，同时培养物排出的代谢废物，聚集在吸收表面，对组织产生毒害作用。固体培养液体培养培养基及其配制8、抗生物质(antibiotic)•种类：卡那霉素、头孢霉素、青霉素、链霉素、庆大霉素等。•浓度：5...