学 院：生命科学学院专业年级: 07 微生物一班组 长：李彩斌指导老师：孙淑静小组成员：马起铝，李国凡 蓝金莲 叶碧霞 郑梅钦 李彩斌 福建农林大学生物工程研究法课程实验方案发酵工程研究法 发酵工程课程实验方案一、实验目的1、掌握发酵微生物菌种筛选原理和方法2、学习和掌握酒精发酵方法和发酵过程的监测方法3、掌握酒精对糖和淀粉的转化率的计算方法二、实验原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌。发酵成熟醪的成分随原料的种类、加工方法、菌种性能不同而不同，分成不挥发性成分和挥发性成分两大类。许多微生物都能利用已糖化进行酒精发酵，但在实际生产中用于酒精发酵的几乎全是酒精酵母，俗称酵母。利用淀粉质原料的酒母在分类上叫啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，是属于子囊菌亚门酵母属的一种单细胞微生物。该种酵母菌繁殖速度快，发酵能力即产酒精能力强，并具有较强的耐酒精能力。淀粉质原料酒精生产的工艺流程如图所示：三、实验材料、试剂和器材1、原料：玉米粉、已知酶活力糖化酶 2、试剂：氢氧化钠、盐酸、硫酸、DNS、碘液、pH4.6 的醋酸盐缓冲液3、器材：三角瓶、试管、培养皿、血球计数器四、实验步骤(一) 酵母菌种的分离与筛选1、称量 50g 的从超市中买来的葡萄放置捣烂，溶于上述的 90ml 的无菌水中，振荡 30min，制成原液。2、在超净台上，取 1ml 原液于 9ml 装有无菌水的试管中，摇匀，制成 10-1菌液，按照同样的方法做成 6 个稀释梯度，难后选择 4 个合适的梯度进行涂平板，培养基为孟加拉红培养基，封口，每个梯度涂布三个重复。3、将平板倒置于 37℃培养箱中培养 3-4d。 4、观察菌落的生长情况，选取菌落生长均匀的浓度梯度，进行划线分离纯化。5、在 37℃培养箱中在培养 3d。6、选取分离纯化好的单菌落用显微镜进行观察。酵母菌落形态一般大而突起，边缘可见球状、卵圆状或假丝状细胞。7、挑取鉴定出来的菌落与 PDA 液体培养基中进行增殖培养。 (二) 酵母产酒精1、糊化：将 600ml 水加到糖化锅中，按照料水比 1：4 的比例称量玉米粉150g，调节 pH 值为 5-6，加入氯化钙(对固形物 0.2％)，加入液化酶(12-20U/g 淀粉)，在剧烈搅拌下，先加热至 72℃，保温 15min，再加热至 90℃，并维持30min，以达到所需的液化程度(DE 值：15-18％)，碘...
