(腺嘌吟)(亮氨酸)(色氨酸)(组氨酸)“四缺”)酵母氮源():葡萄糖即(购买来就配好的)(?(酵母菌储存在-70°C 中,引物和质粒 DNA 储存在-20°C 中)概念:1. 次序转化:指的是先将一种质粒转化进酵母中(常是 DNA-BD/baitplasmid),在选择培养基中选择出阳性克隆,之后再将另外一个质粒(ADfusionlibrary)转化进去。优点:就是比共转化使用更少的质粒 DNA,也就是节约质粒 DNA。2. 共同转化:将两种质粒一起转化进酵母中。优点:比次序转化更容易操作。pGBKT7-…的选择物是:kanamycin(卡那霉素)?pGADT7 的选择物是:ampicillin(氨苄西林)?各种培养基:酵母氮源():(购买来就配好的)葡萄糖即(?“二缺”酵母氮源():(购买来就配好的)葡萄糖即酵母氮源():(购买来就配好的)葡萄糖即酵母氮源():(购买来就配好的)葡萄糖即注意:有两种,一种含有硫酸胺,另外一种不含硫酸胺。我们这用的是含硫酸铵的。(买来就加进去了的)。如果不含硫酸铵,那么要在终浓度的中再加入的硫酸铵,即最终在溶液中加入总量为的与硫酸铵。实际配制的方法是:配制的葡萄糖贮存液(贮存在°C),过滤除菌,待高压灭菌的溶液温度降至°C以下时,再将葡萄糖贮存液加入。(过滤即可使用)酵母氮源,加在水中溶解,调至(大约加即可),之后补水至。高压完后待温度降至 C 以下,加入葡萄糖。培养基蛋白胨酵母提取物琼脂(只有制作平板才用)葡萄糖即培养基蛋白胨酵母提取物腺嘌吟(即终浓度为 0.003%)腺嘌吟可以耐受高温葡萄糖即实际配制的方法是:配制的葡萄糖贮存液(贮存在 C),过滤除菌,待高压灭菌的溶液温度降至°C以下时,再将葡萄糖贮存液加入。(李博士经验这一步不高压,过滤即可使用)配制的腺嘌吟溶液,过滤除菌,待高压灭菌的溶液温度降至 C 以下时,再将腺嘌吟溶液加入。(或将腺嘌吟直接加进去,为了方便我将直接加进去一起高压)(蛋白胨;酵母提取物;水大约)混合后,调至至,加水至,C 高压。注意:♦高压的温度和时间不能太长与太高,C 高压即可。♦可以在中加入的琼脂,以配成平板。♦需要加时,终浓度是-。(可以 C 贮存一个月,加入到平板中去可以 C 贮存一个月。)溶液(即配即用)用下列贮存液来配制:用灭菌水配,如需要可以加热至 C 以助溶。:用灭菌水配,如需要可以加热至°C 以助溶。:用灭菌水配,如需要可以加热至€以助溶。最后配成溶液是:(以为例)终浓度为配制需要加入的物质无菌...