山西医科大学硕士学位论文AP-2α通过增强ER-β表达抑制大肠癌SW620细胞恶性增殖与侵袭能力姓名：杜叶平申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：程牛亮20090518山西医科大学硕士学位论文AP．2a通过增强ER．p表达抑制大肠癌SW620细胞恶性增殖与侵袭能力摘要研究背景：大肠癌是常见的恶性肿瘤之一，全世界范围内大肠癌的发病率处于恶性肿瘤的第3位。西方发达国家，大肠癌发病率处于第2位，仅次于肺癌。我国随着生活水平提高，饮食习惯发生高脂肪，高蛋白，低纤维，低粗粮等结构性改变，使得中国大肠癌出现高发态势，总体发病率也呈上升趋势。越是经济发达地区，大肠癌的患病率就越高。因此，大肠癌已经成为迫切需要社会关注和亟待解决的焦点问题。大肠癌的发生、发展是一个多基因参与的累积过程，目前已发现多个与其发生、发展密切相关的基因，这些基因的改变，影响着大肠黏膜上皮细胞的生物学行为。国内外研究表明，转录因子激活蛋I刍2a(Transcri pt i onfact or act i vat or protei n．2a，AP．2a)在大多数肿瘤中被认为是一种抑癌基因。AP．2a作为一种特殊序列DNA结合蛋白，通过调控靶基因表达产物进而参与肿瘤的恶性增殖、侵袭和转移等。已有研究表明，癌相关基因包括p21w灯厄1P、t ransformi ng growt h fact or- a、c—Ki t 、HER- 2／neu、MCAM／MUC1 8、c- mye、VEGF、MMP一2、KAl l 、Ki SS．1、ER．p等都具有AP．2c【结合位点与顺式调控序列。ER．p是AP．20【的一个靶向调节基因，但在大肠癌中，AP一20‘与ER．13的相互作用及对大肠癌的恶性增殖和侵袭能力的研究国内外尚未开展。这正是本实验亟待深入和解决的问题。本实验的最终目标是阐明核转录因子AP一2a在大肠癌中的可能作用和意义，以及对ER．D表达的调控机制，为揭示大肠癌发生发展的分子机制提供新的线索，为大肠癌基因诊断技术的发展和相关治疗提供新思路。研究目的：①明确核转录因子AP一2a对大肠癌SW620细胞株增殖及侵袭生长能力的影响。②明确核转录因子AP．2a调控ER- 13表达的分子机制。研究方法：①在脂质体介导下将真核表达质粒pcDNA3．1(+)．AP．2a弄- tl pcDNA3．1(+)分别转染人大肠癌细胞株- - SW620细胞，利用实时定量PCR(Real ．Ti me PCRl 、West ernbl ot与凝胶迁移率变动实验(EMSA)鉴定AP．2仪在SW620细胞中的表达及其活性；②利用MTT法和软琼脂克隆形成试验体外观察AP．2a对SW620细胞增殖能力的影响，流式细胞...
