分子生物学实验指导 动植物检疫专业2012，2分子生物学实验注意事项 1． 课前要提前预习实验内容，了解实验设计的原理，理清实验顺序，制定实验方案（没有方案或方案不合理者不能进入实验操作）。2． 由于实验内容多，时间短，多数实验需要同时或穿插进行，一定要做好统筹安排。 3． 实验课中的所有单项实验都属于一个整体流程。实验时间安排上没有上下午晚上等严格的作息安排，一切服从实验进度，必须在理论课上课期间完成。4． 实验的每一步都要详细地记录操作内容、时间、步骤、结果等，以备查询！5． 对任何自己不熟悉的实验仪器都不要随意操作（尤其是微量移液器！）。在操作的过程中发现任何意外的现象都要及时向任课教师汇报。 6． 写作实验报告或实验论文一定要文理通顺、逻辑清晰、图表说明详细，讨论分析透彻。7． 在实验室内不能大声喧哗。 8．在实验的过程中制造的任何垃圾都要丢到垃圾筐里（或先放在自己的桌面一角），严禁随地丢弃！特别注意对废弃细菌的杀灭和有毒垃圾的定点投放。 9．实验结束后要把用过的器皿清洗后归放整齐并清点数目，向教师汇报征得同意后方可离开实验实。 10．值日组的同学最后离开，等待清扫实验室的卫生，关闭门窗水电。11．实验时损坏的任何物品都要及时申报。 实验一 质粒 DNA 的提取1．目的学会最常用的小量制备质粒 DNA 的碱裂解方法。2．原理 根据共价闭合环状质粒 DNA 与线性 DNA 在拓扑学上的差异来分离。在 pH12.0~12.5这个狭窄的范围内，线性 DNA 双螺旋结构解开而被变性。尽管在这项的条件下共价闭合环状质粒 DNA 也会变性，但两条互补链彼此互相盘绕，仍会紧密结合在一起。当加入pH4.8 的乙酸钾高盐缓冲液使 pH 恢复中性时，共价闭合环状质粒 DNA 复性快，而线性的染色体 DNA 复性缓慢，经过离心与蛋白质和大分子 RNA 一起沉淀下去。3．器材超净工作台，接种环，酒精灯，台式离心机，旋涡混合器，微量移液取样器，1.5ml 微量离心管，恒温摇床，摇菌试管，双面微量离心管架，试管架，标签纸，磁力搅拌机。4．试剂 pMD18-T-F 载体菌，LB 培养基 1000ml（含 100ug/ml 氨苄青霉素），葡萄糖/Tris/EDTA(GTE) 溶 液 （ 溶 液 I ） ， NaOH/SDS 溶 液 ( 溶 液 II) ， KAc 溶 液 （ pH4.8 ） ( 溶 液 III)，RNase A，95%乙醇，70%乙醇，TE buffer（pH8.0）。5．实验准备 氨苄青霉素储存液（无菌水配制 5mg/ml，分装后-20°...
