分光光度法测定多巴胺王怀友X,孙悦,唐波(山东师范大学化学系,济南250014摘要:根据多巴胺与亚硝酸钠在pH5.90时的反应产物在300nm处有最大吸收,建立了测定多巴胺注射液中多巴胺浓度的分光光度法。多巴胺质量浓度在0~10LgPmL范围内与吸光度之间遵从朗伯比尔定律,表观摩尔吸光系数为1.85@104L#mol-1#cm-1,检测限为0.1LgPmL。试验了pH、放置时间、加热时间、干扰离子等对测定的影响。本法可用于注射液中多巴胺含量的测定,与药典规定方法对照,结果吻合。关键词:分光光度法;多巴胺;亚硝酸钠;多巴胺注射液中图分类号:O657132文献标识码:A文章编号:1000-0720(200301-0045-03多巴胺是一种神经传递物质,在体内是合成去甲肾上腺素的直接前体,具有重要的生理作用。作为药物,能增强心肌收缩力,对内脏血管有扩张作用,增加血流量,有利于改善休克时重要脏器的血液供应,适用于感染性、心源性、失血性休克以及心脏停搏时起搏升压。显然,建立灵敏简便的测定方法,具有十分重要的意义。现已报道的测定方法有荧光光度法[1],色谱分析法[2]和电化学分析方法[3]。龙云等[4]研究了多巴胺与四氯苯醌之间的荷移反应,用分光光度法测定针剂中的多巴胺,E值仅为1.63@103;文献[5]从甜马铃薯中提取多酚氧化酶,将多巴胺氧化为相应多巴胺色素,建立了测定药剂中多巴胺的分光光度法,但操作繁杂。本研究依据多巴胺与亚硝酸钠在水介质中即可生成有较高吸光度产物的反应,建立了测定多巴胺注射液中多巴胺含量的分光光度法。该法操作简便,灵敏迅速,有宽的线性范围,与英国药典规定的高效液相色谱法[6]对照,结果吻合。1实验部分1.1仪器UV-265紫外可见分光光度计(日本岛津;pHS-3C型酸度计(上海雷磁仪器厂。多巴胺标准储备液100LgPmL(化学对照品,中国药品生物制品检定所,准确称取0.01g多巴胺,用二次水稀释至100mL,4e储存,用时稀释为40LgPmL的工作液。NaNO2(10gPL水溶液,避光保存。HAc-NaAc缓冲溶液(pH5.90,0.1molPLHAc和0.1molPLNaAc以1B16的体积比混合。所用试剂均为分析纯,实验用水均为二次水。1.2实验方法准确移取40LgPmL的多巴胺标准液2mL于10mL比色管中,加NaNO2溶液2mL,HAc-NaAc缓冲溶液5mL,摇匀,置于沸水浴中加热3.5min。取出用流水冷却至室温,用水稀释至刻度,摇匀。以试剂空白为参比,用1cm比色皿在300nm处测量其吸光度。2结果与讨论2.1吸收光谱按实验方法配制溶液后,在分光光度计上,以试剂空白为参比扫描溶液的吸光度,得到吸收光谱如图1所示。由图可见,反应产物Kmax=300nm。NaNO2的Kmax为356nm;多巴胺的Kmax为279nm。2.2反应影响因素研究2.2.1加热时间影响按实验方法,测定6LgPmLX收稿日期:2001-12-20;修订日期:2002-01-09基金项目:国家自然科学基金(29975016及山东自然科学基金(Z2000B03作者简介:王怀友(1952-,男,副教授多巴胺在加热不同时间后的吸光度,结果表明加热时间为3~4min时,吸光度最大。所以选择加热时间为3.5min。2.2.2pH的影响按实验方法测量不同pH值时溶液的吸光度,结果如图2所示。图1吸收曲线Fig.1Absorptioncurve图2pH影响Fig.2EffectofpH(Q多巴胺=2LgPmL由图可见,pH5.9时,溶液的吸光度最大。所以选择pH5.9的HAc-NaAc缓冲溶液,但要严格控制pH值,每次加入缓冲溶液510mL。2.2.3试剂用量影响按照实验方法,保持多巴胺浓度不变,逐步增大NaNO2(10gPL的加入量,测定溶液的吸光度。结果发现,随着NaNO2加入量的增大,溶液的吸光度逐渐增大;当加入量\1.5mL时,溶液的吸光度基本不变,所以确定最佳加入量为2mL。2.2.4试剂加入顺序影响按照实验方法,依照不同顺序加入试剂,测量溶液的吸光度,结果表明试剂加入的最佳顺序为先加NaNO2后加HAc-NaAc缓冲溶液。2.2.5产物的稳定性按照实验方法,测定放置不同时间后溶液的吸光度,结果表明,放置时间在90min之内溶液的吸光度基本不变,产物比较稳定。2.3选择性按照实验方法,研究4LgPmL多巴胺水溶液中各种外来常见离子对体系的影响,控制测定误差在?5%以内,下列离子的允许存在量(LgPmL为:K+(30、Mg2+(25、Cu2+(25、Pb2+(10、Cl-(60、Ca2+(10、Zn2+(100、HPO42-(10、PO43-(6、SO42-(300。2.4方法特性2.4.1标准曲线按实验方法配制多巴胺的标准系列,分别测定其吸光度,实验表明多巴胺的浓度在0~10Lg...
