!!酵母双杂交操作步骤(中文翻译)VIP免费

（酵母菌储存在-70℃中，引物和质粒DNA 储存在-20℃中） 概念： 1. 次序转化:指的是先将一种质粒转化进酵母中（常是DNA-BD/bait plasmid），在选择培养基中选择出阳性克隆，之后再将另外一个质粒（AD fu sion library ）转化进去。优点：就是比共转化使用更少的质粒DNA，也就是节约质粒DNA。 2. 共同转化：将两种质粒一起转化进酵母中。优点：比次序转化更容易操作。 pGBKT7----的选择物是：kanamycin（卡那霉素）？ pGADT7----的选择物是：ampicillin (氨苄西林) ？ 各种SD 培养基： 1) SD/-ade（腺嘌呤）/-leu（亮氨酸）/-trp（色氨酸）/-his （组氨酸）(1000 ml) （？“四缺”） 酵母氮源（YNB）：6.7g ; -ade/-leu/-trp/-his DO supplement 0.60g （购买来就配好的） ; 葡萄糖 20g (即 2%) 2) SD/-leu/-trp/-his (1000 ml) 酵母氮源（YNB）：6.7g ; -leu/-trp/-his DO supplement 0.62g ; （购买来就配好的） 葡萄糖 20g. (即 2%) 3) SD/-leu/-trp (1000 ml) （？“二缺”） 酵母氮源（YNB）：6.7g ; -ade/-leu/-trp/-his DO supplement 0.64g （购买来就配好的）; 葡萄糖 20g (即 2%) 4) SD/-leu (1000 ml) 酵母氮源（YNB）：6.7g ; -leu DO supplement 0.69g ; （购买来就配好的） 葡萄糖 20g (即 2%) 5) SD/-trp (1000 ml) 酵母氮源（YNB）：6.7g ; -ade/-leu/-trp/-his DO supplement 0.74g ; （购买来就配好的） 葡萄糖 20g (即 2%) 注意：YNB 有两种，一种含有硫酸胺，另外一种不含硫酸胺。我们这用的是含硫酸铵的。（买来就加进去了的）。如果不含硫酸铵，那么要在终浓度 0.17%的YNB 中再加入 0.5%的硫酸铵，即最终在1000 ml 溶液中加入总量为 6.7g 的YNB 与硫酸铵。 实际配制的方法是： 1. 配制40%的葡萄糖贮存液（贮存在4℃），过滤除菌，待高压灭菌的溶液温度降至55℃以下时，再将50ml 葡萄糖贮存液加入。（李博士经验这一步不高压，过滤即可使用） 2. 酵母氮源6.7g，加DO supplement 在920ml 水中溶解，调PH 至5.8（李博士的经验大约加10M NaOH 200ul 即可），之后补水至950 ml。 3. 高压完后待温度降至55℃以下，加入50 ml40%葡萄糖。 YPD 培养基(1000 ml) 20 g/L 蛋白胨 10 g/L 酵母提取物 20 g/L 琼脂（只有制作平板才用） 20 g/L 葡萄糖 (即2%) 1x YPDA 培养基(1000 ml) ...