内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。常用的PCR 内参有GAPDH 、β- actin 、18sRNA、28sRNA 、B2M、ACTB、SDHA、HPRT1、ARBP 内参基因 等 正向引物（上游引物）是沿着负链进行不间断延长的 反向引物（下游引物）是沿着正链进行一段段延长的 正链是含有目的基因的那条链。 RT-PCR 为反转录 RCR（reverse transcription PCR）和实时PCR（real time PCR）共同的缩写。逆转录 PCR，或者称反转录 PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)，是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR 中，一条 RNA 链被逆转录成为互补 DNA，再以此为 模板通过 PCR 进行 DNA 扩增。 由一条 RNA 单链转录为互补 DNA(cDNA)称作“逆转录”，由依赖 RNA 的DNA 聚合酶（逆转录酶）来完成。随后，DNA 的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖 DNA 的DNA 聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的PCR。原先的RNA 模板被 RNA 酶 H 降解，留下互补 DNA。 RT-PCR 的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNA。RT-PCR 广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种 RNA 的含量。（检测基因表达的方法，参见Northern Blot 法。 RT-PCR 的关键步骤是在RNA 的反转录，要求RNA 模版为完整 的且不含 DNA、蛋 白 质 等杂质 。常用的反转录酶有两 种，即鸟 类 成髓 细胞性 白 细胞病毒 （avian myeloblastosis virus,AMV）反转录酶和莫 罗 尼 鼠 类 白 血 病病毒 （moloney murine leukemia vrius,MMLV）反转录酶。 RT-PCR 有时候 也 会 指代 实时PCR(real-time PCR)。为了 与 逆转录 PCR 相区 别 ，通常被写作“定量PCR”(quantitative PCR)或者 RTQ-PCR(real-time quantitative PCR)。 3 实时 PCR 实时PCR(real-time PCR)，属 于定量PCR（Q-PCR）的一种，以一定时间内DNA 的增幅 量为基础 进行 DNA 的定量分 析 。 real time PCR 的定量使 用荧 光 色 素 ，目前 有二 种方法。一种是在ds DNA 中插 入 特 异 的荧光 色 素 ，例 如 SYBR Green 荧 光 染 料 ； 另一种使 用一种能 与 增幅 DNA 序 列 中特 定寡 核酸序列 相结 合的一种荧 光 探 针 （probe），如 Taqman 探 针 。两 种方法原理 不同。SYBR Green 荧光 染 ...
