Primer Express TaqMan 引 物 探 针 设 计 一 、 安装软件 ABI 公司 Primer Express v3.0 Primers and Probe Design For Real-Time PCR 二、 Primers/Probes Design Guideline TaqMan Probe Primer Probe 与 Primer 的距离愈近愈好, PCR 产 物大小建议在50-150 bp 为最佳 G/C % 为 30-80 % 避免有重复序列的出现，尤其避免4 个以上G 的出现 Tm 值: 68-70℃ (Quantification assay) Tm 值: 58-60℃ 65-67℃ (Allelic Discrimination assay) Probe 长 : Primer 长 : 13~25 bases (TaqMan MGB probe) 20 bases (Optimal) 13~30 bases (TaqMan probe) 避免连续 6 个A 的序列出现 3’端的前5 个序列里不能超过2个 C+G 5’端第一个序列不能为G (如果选择 FAM-dye 在5’端第二个序列也可以为G) 选择 C 比 G多的strand当作 probe b 避免 3’端的前 4 个序列含有3 个或以上G (GGG-MGB-3’ or GGAG-MGB-3’) a 避免probe的中间区域含有2 个或以上的CC di-nucleotidesa a. 针 对 TaqMan MGB 探 针 b. 参 数 可 选 择 设 定 三 、 Primers & Probes（ Automatically Design） ① 进 入 Primer Express 3.0 软 件 File→ New → 选择 TaqMan MGB Quantification 或 TaqMan Quantification → OK ② Tools →按Add DNA File，寻找序列存取位置，按下 Add，将序列档案加入 空白文件 。亦可在Sequence 的界面中使用 Copy & Paste 复制和粘贴或直接输入 序列。 * Primer Express Software 只 能 接 受 dan, txt, ab1,或 abi 的 档 案 格 式 ， 请 事 先 将 欲 分 析 的 序 列 存 成 纯 文字 档 即 可 (若 序 列 是 从 database download 下 来 时 ,请 刪 除 与 序 列 无 关 的 资 料 )。 ③ 可 勾 选 Double Strand, 即 会 显 示 double stranded DNA sequence。 ④ 各 Tools 选 项 操 作 1. Exclude:不必 要 的 序 列可 利用 Exclude Selected Bases将 序 列 划 掉 。 - 先 选 取 不要 的 序 列范 围 ， 点 选 “Exclude”， 即 可 看见此区域被划 掉 。 2. Junction: 如 果 已 经 知 道 序 列上 junction 位 置 则 可 利用 Junction - 选 取 juctio...
