胚胎植入前诊断中南大学湘雅二医院妇产科王新一、胚胎植入前诊断概念辅助生殖技术的发展：第一代试管婴儿技术（体外受精-胚胎移植，IVF-ET）第二代试管婴儿（显微受精）技术透明带下授精Subzoualinsemination,SUZI卵泡浆内精子注射intracytoplasmicsperminjection,ICSI第三代试管婴儿技术，即在IVF技术的基础上，结合胚胎活检和分子生物学技术，对体外受精的胚胎进行遗传学检测，在确定其正常后再移植回子宫。这就是植入前遗传学诊断。preimplantationgeneticdiagnosis,PGD（一）PGD的适应症1.具有遗传性疾病携带者的夫妇；2.生育过遗传缺陷的患儿，准备再次生育且具有高风险的；3.因遗传性疾病而反复流产的夫妇，为避免紧张、焦虑造成严重的精神负担者。(二)PGD材料来源及取材方式1.卵细胞或极体分析2.卵裂球活检3.胚泡滋养外层细胞活检(二)PGD材料来源及取材方式1卵细胞或极体分析该方法又称孕前诊断，是将卵子的第一极体用显微操作针抽出做遗传学分析。由于卵母细胞在减数分裂过程中，同源染色体之间需经过配对，然后交换遗传物质，因此，正常或突变的等位基因都可能在极体中存在（机率各为50%），如果极体中含有突变基因，说明该基因已转移至极体中，卵母细胞可用于体外受精。这种取材方式只能获得母体的遗传信息，并且对卵母细胞的基因型是根据极体的基因型推测获得的，所以可靠性相对较差。(二)PGD材料来源及取材方式2.卵裂球活检在体外，受精卵分裂到4-6细胞期时，通过显微操作吸取1-2个细胞用于遗传性疾病的诊断或性别的鉴定。现已证实从3-8细胞期的胚胎中取出1-2个卵裂球做活检不会影响胚胎的正常发育。该方法的局限性为：（1）只能获取1或2个卵裂球细胞进行分析，实验条件和技术要求极高，临床运用尚有一定困难。（2）不能检测到胚胎在随后发育中形成的嵌合体。(二)PGD材料来源及取材方式3.胚泡滋养外层细胞活检胚泡期的胚胎分化为内细胞团和滋养层，由于滋养层不参与胎心的发育，因此从中吸出10-30个细胞作遗传学诊断不会对胚胎造成损伤。该方法的优点为取材获得的细胞较多，增加了诊断的可靠性，存在的问题是正常的人工受精卵在体外最多只有25-50%能够发育到胚胎期。(三)PGD的诊断方法在PGD研究早期采用细胞遗传学分析单个卵裂球的染色体核型，由于不能在短时间内完成诊断，必须有胚胎冷冻技术的配合，而如今，分子遗传学技术已成为PGD领域中发展最快、应用最广、研究较为深入的技术和方法。(三)PGD的诊断方法1.以PCR为主的系列技术2.RFLP连锁分析3.ASO斑点杂交4.3’碱基特异PCR方法等5.间期细胞核FISH技术目前已前已能对单细胞基因组进行全基因组扩增，使得对单细胞进行多位点分析成为可能，这一技术称为引物延伸预扩增技术（primerextensionpreamplification,PEP）。最近，又有学者报道利用DNA指纹技术（DNAfingerprinting）对单一胚胎细胞DNA进行分析，诊断胚胎细胞性别和一些单基因遗传病。上述两种技术具有使用细胞少，诊断灵敏度高，一次取材可用于多种疾病诊断等优点，已成为很有发展前途的PGD技术。(四)PGD存在的问题与展望尽管近几年来PGD发展很快，但目前PGD在取材方面仍然主要局限于了解母亲的遗传信息，如从极体取材则只能了解母体的遗传信息。而在卵裂期或胚期取材做PGD分析，虽然可以了解整个胚胎的遗传信息，但若精子内有遗传缺陷，那么卵裂球或胚胎就无法用于种植，从而造成卵细胞的损失。另外，有部分学者认为取材时机最好在受精受卵受精后4-5天，然后采取数个（5-10个左右）早期胚泡滋养外胚层细胞。其优点在于可获得较多的细胞，以增加诊断的准确性，另外滋养外胚层细胞在今后的胚胎发育中将发展为绒毛细胞，从而可避免对胚胎造成外源性的影响。
