PCR 假阴性的原因分析 PCR 的假阳性问题是在PCR 诞生之初就被深刻认识到了，同时由于造成假阳性的因素相对单一，因此假阳性并不是困惑检验工作的主要原因。如果一个项目只是阳性率高敏感性好的话，那么可以认为其阴性结果具备很高的可排除性，仍然有相当的临床适用价值。但PCR 的假阴性在检验工作中仍很严重，并且用些因素经常被人忽略，严重的影响了PCR 的使用。可以想象一种假阳性和假阴性都很高的项目，有什么样的诊断价值。 造成PCR 假阴性的原因是复杂的，也是多样的。主要有： 1.PCR 仪本身的质量问题。PCR 仪设计原理上的差异和经常出现的质量问题（如：温控不准等）给临床带来了诸如非特异性扩增（假阳性）、扩增效率下降(假阴性）等问题. 2.离心机问题。离心机的质量或使用不正确，造成离心标本模板没有分离出来造成假阴性，窃以为这是最易被忽视的问题。其时离心机使用问题不仅在PCR， 在整个检验工作中都是最易被忽视的问题，只是因为在其他工作中不象PCR 那样明显影响检测结果罢了。 离心机是常用的固液分离设备，其利用离心过程中的离心力而将密度不同的物质分离出来。因此离心机的关键在于离心加速度而不是转速，根据牛顿定律可知离心力加速度与转速和有效半径的有关的，因此对于不同有效半径的离心机相同的转速其离心加速度是不同的，转速的调节要因离心机而异，但很遗憾，日常工作中忽视了这个问题。有效半径短的离心加速度就小，同样的时间离心效果就差可能造成分离不出导致假阴性。同时由于高速离心机高速旋转与空气摩擦会产生大量的热，因此对于称能上几万转/分而没有抽真空的离心机实际转速本人持怀疑态度。 3.试剂开壳剂和操作问题造成标本DNA 没有暴露出来，致使扩增无法进行，这是造成假阴性的又一主要因素。 PCR 扩增方面的技术解答 1、 PCR 括增的基本原理 PCR (Polymerase Chain Reaction) 是体外高效复制DNA 的技术，该技术几乎贯穿于现在分子生物学的各个领域。PCR 体系由模板，特异性引物，高温聚合酶，脱氧核糖核酸几部分组成。反应过程分模板高温变性（Denaturation），引物与模板低温退火（Annealing） ,引物在高温聚合酶的作用下延伸（Extention），在一定的条件下，退火和延伸可以合二为一。 2、高温聚合酶分类 高温DNA 聚合酶主要用于DNA 片段的高温快速扩增（合成），它以单链DNA 或 RNA为模板，在 dNTP 和 Mg 离子存在时，在特定的引物引导下按5’ -3’ 的方向合...
