- 1 - 实验十一 植物原生质体的分离及融合（理论） 原生质体培养的主要目的是实现远缘物种的体细胞杂交，外源染色体、D N A 或细胞器的导入，创造新的远缘杂种
全部技术环节包括原生质体分离、原生质体培养、体细胞杂交、杂种细胞产生愈伤组织及再生植株等
一、原生质体的概念 1、原生质体 是指用特殊方法脱去植物细胞壁的、裸露的、有生活力的原生质团
没有细胞壁，但具有活细胞的一切特征
2、原生质体培养 指将植物细胞游离成原生质体，在适宜的培养条件下，依据细胞的全能性使其再生细胞壁，进行细胞的分裂分化，并发育成完整植株的过程
二、原生质体的分离方法 1、机械分离法 - 2 - 采用渗透方法使细胞发生质壁分离，然后切开细胞壁释放出原生质体
特点是原生质体产量很低；方法繁琐费力；局限性大
2、酶法分离 采用果胶酶、纤维素酶等酶类对植物细胞壁进行酶解，得到原生质体
三、原生质体纯化与活力测定 1、原生质体的纯化 a、离心沉淀法 应用原生质体的比重大于溶液的性质，将原生质体沉于底部，收集原生质体备用
b、漂浮法 应用渗透剂含量较高的洗涤液使原生质体漂浮于液体表面
依次通过网筛过滤、离心、收集沉淀，再用蔗糖液洗涤离心 2—3 次，漂浮收集即可
c、界面法 - 3 - 选用两种不同渗透浓度的溶液，一种溶液密度大于原生质体的密度，另一种小于原生质体的密度，进行界面收集原生质体
2、活力测定 a、形态识别 形态上完整，含有饱满的细胞质，颜色新鲜的即为存活的原生质体
b、染色识别 用0
1%酚番红或伊凡蓝进行染色，后进行观察，有活力而质膜完整的原生质体对染料有排斥作用而不被染色，死亡的却被染上颜色
四、原生质体的培养方法 培养方法有四种，即固体薄层培养法、液体浅层培养法、双层培养法和琼脂糖珠培养法
1、固体薄层培养法 又叫平板培养法，指将一定体积的原生质体按照一定细胞密度与等
