siRNA中文操作手册(lipo2000)VIP免费

THE RNAi COMPANY RNAi 产 品 使 用 手 册 上 海 吉 玛 制 药 技 术 有 限 公 司 Shanghai GenePharma Co.,Ltd. 1 Ⅰ. RNAi 简介 1 A. RNAi 实验原理 B. RNAi 实验流程 C. RNAi 实验所需试剂 D. 上海吉玛 RNAi 相关产品 Ⅱ. siRNA 设计 7 A. 哺乳动物 siRNA 设计 B. 上海吉玛 siRNA 产品特性 C. siRNA oligo 技术数据 Ⅲ. siRNA 对照 9 A. 普通阴性对照 B. 荧光标记的阴性对照 C. siRNA 阳性对照 D. 转染试剂对照 E. 避免 off-target 对照 Ⅳ. siRNA 转染 10A. siRNA 转染的方法 B. Lipofectamin2000 转染试剂 C. Lipofectamin2000 适用的细胞类型 D. 转染前细胞培养 E. Lipofectamin：siRNA/DNA 比例 F. 贴壁细胞转染程序 G. 悬浮细胞 siRNA 转染程序 H. DNA 和 siRNA 共转染细胞程序 I. 体内 siRNA 导入方法 J. siRNA 转染常见问题与建议 Ⅴ. mRNA 水平 RNAi 效果监测 15 A. siRNA 细胞转染条件优化 B. Real-Time PCR RNAi 效果检测 C. Real-Time PCR 结果分析 Ⅵ. 蛋白质水平 RNAi 效果监测 20A. w estern-blot 原理 B. w estern-blot 操作步骤 C. estern-blot 上样液的制备 wD. w estern-blot 常用试剂的配制 Ⅶ. RNAi 实验常见问题解答 22 2 Ⅰ. RNAi 简介 A. RNAi 实验原理 RNA 干扰（RNA interfering，RNAi）现象是由与靶基因序列同源的双链 RNA（dou ble-stranded RNA，dsRNA）引发的广泛存在于生物体内的序列特异性基因转录后的沉默过程。细胞中的核糖核酸酶III 家族成员之一的， dsRNA 特异性的核酸酶 Dicer 将 dsRNA 裂解成由 21-25 个核苷酸组成的小干扰 RNA (small interfering RNA，siRNA)，随后 siRNA 作为介导子引起特异性地降解相同序列的 mRNA，从而阻断相应基因表达的转录后基因沉默机制。 3 B. RNAi 实验流程 C. RNAi实验所需试剂 试剂种类 试剂用途 siRNA oligo 与您所要敲除靶基因的转录本（mRNA）完全互补 转染试剂 如脂质体法，lipofectamin2000(invitrogen)，上海吉玛的转染试剂Lipofectamin2000，电穿孔法等 实验对照 包括阴性和阳性及 Mocking control 基因表达的检测方法 如 mRNA 水平检测用qRT-PCR；蛋白表达水平检测用w estern blot 靶基因确认 (Target Gene Identification) siRNA 设计 （...