乙 肝 五 项 检 测 ( ELISA 法 ) 一 、检 测 目的: 乙 型 肝 炎 病 毒 标 志 物 (HBsAgHBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb)检 测 。 二、测 定原理: 分 别 采 用 双 抗 体 ( 抗 原 ) 夹 心 法 和 竞 争 法 。 HBsAg、HBsAb 原 理 : 采 用 单 克 隆 抗 -HBs(HbsAg)包 被 反 应 板 , 加 入 待 测 标 本 ,同 时 加 入 多 克 隆 抗 -HBs-HRP(HBsAg-HRP),当 标 本 中 存 在 HBsAg( HBsAb) 时 , 该HBsAg ( HBsAb ) 与 包 被 抗 - HBsAg ( HBsAb ) 结 合 并 与 抗 - HBsAg-HRP( HbsAb-HRP) 结 合 形 成 抗 - HBsAg( HBsAb) -抗 - HBsAg-HRP( HBsAb-HRP)复 合 物 , 加 入 TMB 底 物 产 生 显 色 反 应 , 反 之 则 无 显 色 反 应 。 HBeAg 原 理 :采 用 抗 -HBe 包 被 反 应 板 ,加 入 待 测 标 本 ,同 时 加 入 抗 —HBe-HRP,如待 测 样本 中 抗 HBeAg 时 , 就与 包 被 抗 -HBe、抗 —HBe-HRP 结 合 形 成 复 合 物 , 加入 TMB 底 物 产 生 显 色 反 应 , 反 之 则 无 显 色 反 应 。 HBeAb 原 理 : 采 用 抗 -HBe、HBeAg 包 被 反 应 板 , 加 入 待 测 标 本 , 同 时 加 入HBe-HRP, 与 抗 原 形 成 竞 争 结 合 , 如待 测 样本 中 抗 -HBe 含量高, 则 抗 —HBe-HRP与 HBeAg 结 合 少, 加 入 TMB 底 物 时 显 色 淡, 反 之 则 显 色 深。 HBcAb 原 理 : 采 用 基因工程重组 HbcAg 包 被 反 应 板 , 加 入 待 测 标 本 , 同 时 加 入HBc-HRP, 与 抗 原 形 成 竞 争 结 合 , 如待 测 样本 中 抗 -HBc 含量高, 则 抗 —HBc-HRP与 HBcAg 结 合 少, 加 入 TMB 底 物 时 显 色 淡, 反 之 则 显 色 深。 三 、操作步骤: 1、将 试 剂 从 冷 藏 室 中 取 出 , 30 分 钟 后 平 衡 至 室 温 方 可 开 启 使 用 。 2、用 蒸 馏 水 将 PBST 浓 缩 液 20 倍 稀 释 , 作 为 洗 液 。 3、将 微 孔 条 固 定 于 支 架 上 , 按 序 编 号 。 4、按 具 体 使 用 试 剂 盒 说 明 书 加 ...