细菌内毒素知识VIP免费

细菌内毒素知识细菌内毒素的定义细菌内毒素的危害细菌内毒素的理化性质药品生产中污染细菌内毒素的途径4123知识大纲Clicktoaddtitleinhere细菌内毒素的去除方法5Clicktoaddtitleinhere细菌内毒素的检测方法61.细菌内毒素的定义1.1细菌内毒素的定义英文称作bacterialEndotoxin，它是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖（LipoplySaccharide）简称LPS。它广泛分布于革兰氏阴性菌（如大肠杆菌、布氏杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌、沙门氏菌等）及其它微生物（如衣原体、立克次氏体、螺旋体等）的细胞壁层。1.细菌内毒素的定义从示意图我们可以知道：细菌内毒素不是细菌或细菌的代谢产物，而是细菌死亡或裂解后才释放出来的一种具有生物活性的物质1.2脂多糖示意图1.细菌内毒素的定义1.3脂多糖的组成脂质A（LipidA）：糖磷脂。是细菌内毒素生物学活性的主要组分，无种属特异性。核心多糖(corepolysaccharide)：位于脂质A的外层，有种属特异性。特异多糖(specificpolysaccharide)：由数个至数十个低聚糖重复单位组成的多糖链。具有种属特异性。革兰氏阴性菌的菌体抗原（O抗原）2.细菌内毒素的危害细菌内毒素为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。当人体注入过量的细菌内毒素，将会引起细菌内毒素休克，组织损伤，甚至死亡。通常也将细菌内毒素称为热原。3.细菌内毒素的理化性质①耐热性：在60℃加热1h不受影响，100℃加热也不降解，在180℃加热3～4小时，250℃加热30～45分钟或650℃加热1分钟才可使热原彻底破坏；②可滤过性：相对分子质量从几千到几十万不等（在水溶液中，其相对分子质量可为几十万到几百万不等），可用适当滤器除去。③水溶性：热原溶于水；④不挥发性：热原溶于水，但不挥发，据此可采用蒸馏法制备无热原注射用水。热原易被水雾带入蒸馏水，注意防止；⑤不耐酸碱性⑥易被吸附性：可被活性炭等吸附剂吸附。4.药品生产中污染细菌内毒素的途径①从表达载体本身引入基因工程蛋白通常采用细菌、酵母、哺乳动物细胞或昆虫细胞作为宿主进行大规模发酵生产，但大多是以大肠杆菌作为表达系统。以大肠杆菌作为表达系统的蛋白通常都是在胞内表达．在纯化蛋白之前必须通过高压匀浆超声波破碎或低压渗透等方法将菌体破壁，以释放蛋白。同时细胞壁内的脂多糖也大量释放到缓冲液中，这是内毒素存在的主要原因；②从溶剂或缓冲液中引入这是注射剂出现热原的一个重要原因。如蒸馏水器结构不合理，人员操作不当，或注射水在存放期内污染热原；缓冲液配制或保存不当，引入污染。③从原辅料中带入容易滋长微生物的原辅料，如PBNa，葡萄糖等常会污染热原。④从容器、用具、管道和设备中带入由于容器、用具清洗不彻底或处理时间不够，导致热原未去除干净；或设备有设计缺陷，存在清洗死角。⑤从制备环境中带入环境洁净度级别不够，非密闭性生产而引入污染。5.细菌内毒素的去除方法5.1物理法5.1.1高温降解法在180℃加热3～4h、200℃加热60min或250℃加热30～45min可使内毒素彻底破坏。因此耐热物品如玻璃制品、金属制品、生产过程中所用的容器和其它用具等，均可采用此法破坏内毒素。5.1.2吸附法内毒素在水溶液中可被活性炭、白陶土等吸附而除去。由于活性炭性质稳定、吸附性强兼具助滤和脱色作用，在制剂生产中获得一定的应用，但应考虑活性碳自身的去除问题，和吸附药液所造成的主药的损失。5.1.3超滤法可基于产品的分子量，选择合适的超滤膜进行处理，考虑到内毒素的聚集的多变性，选用超滤法除蛋白溶液内毒素，并不是很合适的。5.细菌内毒素的去除方法5.2化学降解法热原能被强酸、强碱、强氧化剂破坏。玻璃容器及用具、配液用玻璃器皿、输液瓶等可用重铬酸钾硫酸清洁液或氢氧化钠（如0.5MNaOH处理30min）处理，破坏热原。5.细菌内毒素的去除方法5.3层析法5.3.1疏水层析去内毒素内毒素的类脂A部分有很强的疏水性。但在高盐条件下会凝集，无法上疏水柱，因此可同通过选择结合目标蛋白的疏水介质将其去除；5.3.2阴离子交换层析去除内毒素由于内毒素带有许多磷酸基和羧基基团，带大量的负电荷，可与阴离子交换介质如Q或DEAE有较强...