高二生物基因工程知识点 一、基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA 重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA 分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA 重组技术。 二、基因工程的原理及技术 原理：基因重组技术 基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶) (1)来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 (2)功能：能够识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 (3)结果：经限制酶切割产生的DNA 片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端. 2.“分子缝合针”——DNA 连接酶 (1)两种DNA 连接酶(E•coliDNA 连接酶和T4DNA 连接酶)的比较： ①.相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②.区别：E•coliDNA 连接酶来源于T4 噬菌体，只能将双链DNA 片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA 连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 (2)与DNA 聚合酶作用的异同:DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA 连接酶是连接两个DNA 片段的末端，形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”——载体 (1)载体具备的条件： ①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA 片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA 的鉴定和选择。 (2)最常用的载体是质粒： 它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA 分子。 (3)其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒 基因工程的基本操作程序 第一步：目的基因的获取 1.目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。 2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 3.PCR 技术扩增目的基因 (1)原理：DNA 双链复制 (2)过程：①加热至90～95℃DNA 解链; ②冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA 链; ③加热至70～75℃，热稳定DNA 聚合酶从引物起始互补链的合成 第二步：基因表达载体的构建 1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。 2.组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因 (1)启动子：是一段有特殊结构的DNA 片段，位于基因的首端，是RNA ...
