慢病毒( Lentivirus )载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷I 型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体
区别一般的 逆转录病毒载体 ,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力
基本概述慢病毒载体 的研究发展得很快, 研究的也非常深入
该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上, 从而达到持久性表达
在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果,在美国已经开展了临床研究, 效果非常理想,因此具有广阔的应用前景
慢病毒的应用目前慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi 的研究中
由于有些类型细胞脂质体转染效果差,转移到细胞内的siRNA 半衰期短,体外合成siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的, 因而使其应用受到较大的限制
采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体 , 然后转移到细胞内转录siRNA 的策略,不但使脂质体有效转染的细胞种类增加,而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA ,在长期稳定表达载体的细胞中, 甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用
在所构建的 siRNA 表达载体中,是由 RNA 聚合酶 Ⅲ启动子来指导RNA 合成的,这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列, 而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾
当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续4 个或 5 个 T 时,它指导的转录就会停止,在转录产物 3’端形成 1~4 个 U
U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子,其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游,适合于表达~21ntRNA 和~ 50ntRNA 茎环结构( stem loop)
在 siRNA 表达载体中,构成siRNA 的正义与反义链,可由各自的启动子分别转录,然后两条链互补结合形成siRNA ;也可由