禽流感及新城疫抗体检测操作神木市畜牧业发展中心王建兵1检测背景2检测原理3检测准备4检测操作5检测判定6注意事项禽流感：是由禽流感病毒引起的一种禽类（家禽和野禽）的烈性传染病，被世界动物卫生组织（OIE)定为A类传染病。禽流感病毒感染后，呈现出较严重的全身性、出血性、败血性症状，死亡率较高。禽流感病毒不仅能引起禽类严重的疾病，而且对人类和哺乳类动物也能造成感染。为了有效预防和控制该病的发生和流行，农业部要求对所有家禽和人工饲养的鹌鹑、鸽子等进行高致病性禽流感强制免疫。检测背景新城疫：俗名鸡瘟，是由副bai黏病毒引起的一种急性高度接触性烈性传染病。主要du以20～50日龄的肉鸡zhi多发，鸡群精神沉郁、食欲减少至废绝，体温升高，常甩头发出“咯咯”声，拉黄绿色不成型稀粪，开始出现零星鸡只瘫痪，两天后表现肌肉震颤、病鸡嗉囊积液。病程一般为5～7天，康复后出现歪颈、观星等神经症状。二类疫病，强制免疫检测背景血凝试验血凝抑制试验检测原理许多病毒表面有血凝素，能与鸡豚鼠人等红细胞表面受体结合，从而出现红细胞凝集现象，称为病毒的血凝现象。血凝血凝抑制当病毒与相应的抗病毒抗体结合后，能使得红细胞的凝集现象受到抑制，称为病毒血凝抑制现象。红细胞表面的受体可以和病毒的血凝素结合。—受体血凝素红细胞病毒病毒和红细胞不断结合在一起，肉眼看到的是红细胞凝集到了一起。发生血凝。病毒病毒红细胞红细胞红细胞当出现抗体时，抗体和病毒发生特异性结合，形成病毒抗体复合物。从而抑制了病毒与红细胞的结合。病毒抗体红细胞在一定的病毒和红细胞中，当抗体含量充足时，红细胞完全不凝集。最后沉积在液体底部。病毒抗体复合物红细胞当抗体含量不足时，可发生部分凝集反应。以此来判断抗体的含量。病毒抗体复合物红细胞红细胞未经免疫的成年公鸡（公鸡红细胞较大）生理盐水新城疫禽流感病毒抗原待测血清90o微量血凝板振荡器离心机移液器及枪头等检测准备1%鸡红细胞悬液的制备备好的公鸡翅下采血，将鸡血5毫升转到10毫升离心管中，再加入生理盐水，颠倒混匀，2000转/分离心3-4分钟，离心后弃去上清液。如此反复3到4次，至上清液清晰。最后离心后弃上清液。容量瓶中加入99毫升生理盐水，用移液枪吸取1毫升红细胞，加入到容量瓶中备用。检测准备1.在v型微量反应板中，每孔加25微升生理盐水。2.第1孔加25微升抗原，反复抽打3-5次混匀。3.从第1孔吸取25微升抗原加入第2孔，混匀后吸取25微升加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取25微升弃去。血凝试验操作4.每孔加25微升生理盐水。5.每孔加入25微升1%鸡红细胞悬液。6.将反应板在振荡器上震荡1-2分钟或轻扣反应板混合反应物，在室温（20-25℃）下静置20-30分钟或2-8℃45-60分钟。血凝试验操作将反应板倾斜60度，观察红细胞有无泪珠状流淌，完全无泪珠样流淌（100%凝集）的最高稀释倍数为血凝效价。结果判定完全凝集在A8，其稀释倍数为28，所以血凝效价为1：256.1.抗原稀释液制作即在1毫升抗原里加入63毫升盐水血凝抑制试验操作641425612.在v型微量反应板中，1-11孔每孔加25微升生理盐水。12孔加入50微升盐水3.第1孔加25微升待检血清，反复抽打3-5次混匀。G1H1分别加入阴阳性血清。4.从第1孔吸取25微升待检血清加入第2孔，混匀后吸取25微升加入第3孔，如此进行对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取25微升弃去。血凝抑制试验操作5.1-11孔，每孔加25微升抗原稀释液。6.将反应板在振荡器上震荡1-2分钟或轻扣反应板混合反应物，在室温下静置30分钟。7.每孔加入25微升1%鸡红细胞悬液。血凝抑制试验操作8.将反应板在振荡器上震荡1-2分钟或轻扣反应板混合反应物，在室温20-25℃下静置20-30分钟。血凝抑制试验操作病毒对照发生凝集；空白对照无自凝；阴性对照血清抗体效价不高于1：4；阳性对照血清抗体效价误差在1个滴度。完全符合上述四个条件，判断为试验成立。结果判定血凝抑制试验，反应板倾斜后，红细胞发生流淌，为不凝结，不发生流淌，为凝集。被检样品HI效价≤1:4判...
