第七章寄生虫标本的采集、保存、制作和观察方法一、寄生虫标本的种类：（一）浸渍标本：5~10%福尔马林或7%酒精；适宜于昆虫、蠕虫和组织、器官。（二）干制标本：防腐处理后干燥保存；适宜于有翅昆虫、吸虫的中间宿主。注意防潮、防霉、防蛀。（三）玻片标本：涂片标本（临时性）：检查血液或组织内的寄生虫，肠道和腔道内的原虫；如弓形虫、疟原虫、球虫内生发育阶段虫体；整封标本（永久性）：用于较小的蠕虫、昆虫或虫体的一部分；切片标本（永久性）：组织或器官内的寄生虫；或大型虫体的局部切片。采集标本需要：1、采集标本之前，应先了解所要采集的寄生虫的形态、生活史、寄生部位、生活习性以及地理分布等基本生物学特性。2、采集过程需要：1）详细记录；2）保存标本的完整；3）作好工作人员的防护。3、剖检家畜时寄生虫标本的采集按以下顺序收集样品，以采集标本：血液、皮肤、皮下组织、脏器、脑脊髓。二、蠕虫标本的采集、保存和观察方法二、蠕虫标本的采集、保存和观察方法蠕虫标本包括：成虫、虫卵和幼虫。一般步骤：采集→→→→→清洁固定脱固定液染色分色↓↓↑↓↓→→→→保存脱水↓瓶装标本透明↓制片（一）采集与清洁：注意采集标本的完整性，同时进行标本的清洁；生理盐水冲洗，一些虫体需在接近体温的生理盐水中放置（微振数分钟），洗去体表附着物，排出肠道内容物。（二）固定与保存：固定的作用：使标本的形态、结构和成分被化学试剂固定下来使之与生活时相仿；防止组织细胞自溶和腐败；沉淀和凝固细胞内的物质，以使不同成分产生不同的折光率便于染色后的识别；有些固定剂有助染的功能，可与细胞中的蛋白质结合，又能与染料结合；固化组织，不易变形。根据不同需要放入合适的固定液中固定；转入保存液中保存，等待进一步使用。固定方法：物理方法：热、冰冻或干燥等；化学方法：固定剂，单一或混合，根据需要选择使用；固定剂分类：还原剂：酒精、甲醛、甲醇等；氧化剂：苦味酸、重铬酸钾、锇酸等。固定剂种类：单一固定液：5~10%福尔马林，70%酒精，0.3~5%醋酸，甲醇等；混合固定液：多种卡氏（Carnoy)固定液：纯酒精:冰醋酸:氯仿=6:1:3，多用于细胞学染色前固定，一般0.5~4小时，固定后用95%酒精洗涤2次，也可保存于80%酒精。可用于多种染色。鲍氏(Bouin)固定液:苦味酸饱和溶液:40%福尔马林:冰醋酸=15:5:1，用前配制。一般固定12~24h,可继续保存在70%酒精中，对苏木素和酸性复红易于着色。固定注意事项：洗净后立即固定；大块组织修成直径不超过5mm的小块；固定小型虫体或组织时，在容器底部垫上棉花，使固定液均匀渗入；固定液最好新鲜配制；固定后如果不及时制作标本，转入相应保存液中。浸渍标本保存在相应的标本缸内，贴上标签、日期、虫种、采集地区等。（三）染色（三）染色染色：组织或细胞的不同部分染上不同的颜色，产生不同的折光率，使组织或细胞内的构造在显微镜下显得更加清晰。染料：有色的有机化合物，与被染组织间有亲和力。由发色团和助色团2部分组成。染料分类：天然染料：苏木精、胭脂红、卡红等；人工染料：多由煤焦油中提出的，亦称煤焦油染料。根据化学反应不同分为：碱性染料和酸性染料。碱性染料：大多为氯化物、硫酸盐和醋酸盐，其染色作用基团是阳离子。常用的是：美蓝：主要的细胞核染料，常用1~2%的水溶液；碱性复红：细胞核染料，配制成碳酸复红，可以作为昆虫几丁质染色剂，易褪色，不宜用于永久制片保存。甲苯胺蓝：常用0.3~1%的水溶液，用于原虫的染色。孔雀绿：一般做活体染色；又可作为指示剂显示活细胞内容物。用0.01~1%的水溶液。吖啶橙：活体染色剂；也是重要的荧光素，用于原虫和蠕虫幼虫的荧光染色。可使原虫的DNA发出亮绿色，RNA发出橙红色；使蠕虫幼虫活体发出红、绿相嵌的荧光，死的虫体发出绿色荧光。酸性染料：多为钠盐，偶尔为钾、钙或铵盐。染色作用基团是阴离子，一般作为细胞质的染色剂。常用的是：甲基蓝：溶于水、酒精，水溶液配方：甲基蓝1g:氯化钠6g:水100ml。酸性复红：溶于水和酒精。伊红：是细胞质和酸性颗粒等常用的染料。常与苏木精合染，即H.E染色。苏丹III：红色粉末，用于染脂肪，配成70...
