水稻组织石蜡制片技术

水稻组织石蜡制片流程材料准备：10ml 离心管（或 5ml 离心管）、胶头滴管、真空泵、切片机、染色缸、烘箱、烘片机，镊子。酒精、自来水、二甲苯、冰醋酸、甲醛、粘片剂（可用鸡蛋清/甘油 =1/1，加防腐剂配成）、染色剂试剂配制：FAA 固定液： 70%乙醇：乙酸：甲醛 =80:5:5 75%、85%、95%，无水乙醇染色缸内染液：视情况而定，可参考染色步骤。粘片剂：鸡蛋清 /甘油 =1：1，再根据量加入少许防腐剂（如苯甲酸钠、山梨酸钾或潮霉素等）处理顺序：离心管中加固定液，材料取好后放入固定液中。水稻叶片取下后如果不立即放入固定液中，叶片会卷起来。不要先取材料后加固定液。一、固定FAA 固定液 ，真空泵抽气（至 0.8-0.9 间红线后再过十五分钟） ，过夜注意：固定液体积至少为材料体积的5 至 6 倍。材料体积较小时，取2ml 左右。石蜡制片不像其他分子实验那样力求精确。我的做法是将胶头滴管1ml 位置沾上标签，每次吸溶液到标签附近即可，比用移液器省力许多。二、脱水75%酒精85%酒精95%酒精无水酒精无水酒精每步处理各 1h。三、透明（A：酒精 B：二甲苯）A/B=3/1 A/B=1/1A/B=1/3 B B 每步处理各 1h。透明完成后，一般情况下，材料变成半透明玻璃色。四、浸蜡（B：二甲苯C：石蜡）此步在70 度烘箱中B/C=1/1C1 C2 C3 注意：B/C=1/1 这一步尤其需要注意， 因为比较幼嫩的组织遇到石蜡易皱缩，皱缩后的材料石蜡就很难透入了。解决的方法是让是让石蜡浓度缓慢升高。二甲苯中石蜡的浓度应该慢慢升高！通常的方法是向有材料的二甲苯溶液中慢慢加浮蜡。（材料与石蜡块均沉于二甲苯底部，当石蜡溶解时造成材料四周的短时局部石蜡浓度过高会造成材料皱缩变形。 ）浮蜡制法：将融化的石蜡在凝固过程中不停地快速搅动，使气泡进入蜡体内，最终凝成蜡块中容有大量小气泡，成为浮蜡。 （搅到蜡快完全凝结时停下，不然就成一摊蜡屑了。）（石蜡比二甲苯密度大）因石蜡浮于二甲苯上部，不会与材料接触，所以材料不会皱缩变形。B/C=1/1C1 详细的操作过程：（我的做法，仅供参考）B：此时材料在常温下通风橱中的离心管里。将离心管里的二甲苯倒出，加入4ml 新二甲苯。向其中加入玉米粒大小浮蜡，溶解半小时左右后，浮蜡不再溶解。盖好盖子放入七十度烘箱。浮蜡溶解后，再加玉米粒大小浮蜡，待其溶解。直至浮蜡与二甲苯总共有8ml 左右。此时 B/C=1/1，可以过夜。将混合液体倒去 4ml 继续重复前法至 8ml，此时石蜡占 3/4 了...