流式细胞仪检测细胞凋亡操作流程-ActiveCaspase-3检测细胞凋亡VIP专享

1 Ac tive Caspase-3 检测细胞凋亡实验原理Caspase-3 在早期凋亡细胞中就已经活化，是凋亡程序中的重要的Caspase 酶。凋亡细胞中， 32kD 的原酶 (Pro-caspase-3)裂解为一个 17-21kD 亚单位和一个12kD 亚单位，两个亚单位形成二聚体，即为活化的Caspase-3，活化的Caspase-3 又水解、活化其它Caspase 酶和多种胞浆内成分（如D4-GDI ，Bcl-2）和核内成分（如 PARP）。PharMingen 多克隆或单克隆 Caspase-3 抗体可以识别 Caspase-3 活化形式，它特异性识别由无活性的Pro-Caspase-3 活化水解后的暴露的断裂端，C92 单克隆抗体与 Pro-Caspase-3 无交叉反应。Active Caspase-3 Apoptosis Kit 特为流式细胞术分析凋亡细胞的Caspase-3 而设计。包括荧光标记多克隆兔抗Active-Caspase-3 抗体（ Anti-Active Caspase-3 FITC 或 Anti-Active Caspase-3 PE）、固定 /破膜剂、破膜 /冲洗缓冲液。2 实验步骤1Camptothecin 诱导细胞凋亡在 DNA 合成中，需要拓扑异构酶I。Camptothecin 是拓扑异构酶 I 的抑制剂，它在体外依剂量不同而影响凋亡的发生。在此，Camptothecin 做为常规的凋亡诱导方案，辅助细胞凋亡分析。凋亡诱导试验用品1.用 DMSO 制备 1.0mM 的 Camptothecin 储备液2.Jurkat T 细胞（ ATCC TIB-152 ）凋亡诱导试验步骤1.1 106cells/ml 增殖的 Jurkat T 细胞加入 Camptothecin，Camptothecin 终浓度为 4-6 M。2.细胞 37 C 孵育 4 小时。2Active Caspase-3 染色步骤试验用品：1.12 75mm 的 Falcon 管2.PBS 缓冲液3.凋亡检测试剂盒Product Cat. No.SizePE Active Caspase-3 Apoptosis Kit 包括： PE-conjugated Polyclonal Rabit Anti-Active Caspase-3 Antibody Cytofix/Cytoperm Solution Perm/Wash Buffer（10 ）550914 100 Tests FITC Active Caspase-3 Apoptosis Kit 包括： FITC-conjugated Polyclonal Rabit Anti-Active Caspase-3 Antibody Cytofix/Cytoperm Solution Perm/Wash Buffer（10 ）550480 100 Tests 染色步骤：