流式细胞仪检测细胞凋亡操作流程-BrdUFlowKits检测细胞增殖VIP专享

1 实验原理B rdU Flow K its 检测细 胞增殖BrdU中文全名 5-溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在 DNA 合成期（ S期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Brdu 单克隆抗体，荧光染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。BrdU Flow Kits 是用 BrdU染色和流式分析结合高效的试剂盒，包括在BrdU 存在下培养细胞，以适宜浓度的DNA 酶使胞内 DNA 变性，加强掺入 BrdU 与抗体的亲和力，同时保留胞内蛋白结构和荧光素荧光强度，从而避免了DNA 变性条件与胞内及表面标志同时检测条件的冲突，运用荧光标记的抗细胞表面抗原单抗及抗细胞因子单抗,结合固定、破膜、通透等处理技术使同时检测细胞活化、增殖、DNA 合成及胞内细胞因子的分泌成为可能。 7-AAD 染色总 DNA ，通过 BrdU和7-AAD 双色染色就能刻画中细胞在整个细胞周期中增殖时期的特点。BrdU Flow Kits 试剂盒FITC BrdU Flow Kit Cat. No. 559619 (50 tests) Cat. No. 557891 (4 ×50 tests) APC BrdU Flow Kit Cat. No. 552598 (50 tests) Cat. No. 557892 (4 ×50 tests) 1. 抗 BrdU 荧光抗体每管 50μ l 染色 50 样本 (106 cells/ 样本 ). FITC BrdU Flow Kit(Cat. No. 559619) 包含 50μ l FITC anti-BrdU抗体。 APC BrdU Flow Kit (Cat. No. 2 552598), 包含 50 μ l APC anti-BrdU 抗体。抗体使用前用BD Perm/Wash Buffer按照1:50稀释。每个样本加入 50 μ l 稀释抗体。2. BD Cytofix/Cytoperm? Buffer 一步法固定透膜试剂用于进行细胞内染色。此试剂维持细胞形态，固定细胞蛋白，为下一步胞内染色进行透膜。3. BD Perm/Wash Buffer 10×浓缩液，使用时用去离子水按照1：10稀释。 Perm/Wash Buffer (1 ×)只能用于固定好的细胞，在未固定的细胞使用该试剂会造成细胞的损伤。4. BD Cytoperm? Plus Buffer BD Cytoperm Plus Buffer 作为染色增强和二次破膜试剂(100 μl/sample)。只能用于固定好的细胞。BrdU 每个瓶含有 0.5ml 的 10 mg/ml BrdU ，稀释于 1× DPBS中的 (32.5 mM) 溶液。无菌制备所提供的BrdU 溶液， (0.22 μ m 过滤 )其不含有防腐剂；因此推荐在无菌条件下处理该溶液。该母液可以通过腹膜内（i.p. ）注射于动物或者稀释到 1 mM...