环境工程微生物试验指导书资料

1 实验一光学显微镜的操作及细菌形态观察1.1 实验目的(1)掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养。(2)观察几种典型细菌的形态与构造，学会绘制微生物图。1.2 实验器材显微镜、二甲苯、香柏油、载玻片、盖玻片、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、球衣菌、假单胞菌、固氮菌标本片。1.3 显微镜的结构及其操作方法1.3.1 普通光学显微镜 (Light Microscope) 1.3.1.1 光学显微镜的结构和各部件作用观察、检验微生物通常用光学生物显微镜（见图1-1），显微镜分机械装置和光学系统两部分。一 机械装置(1) 镜筒：镜筒长度一般是160cm。它的上端装目镜，下端装物镜回转板。回转板上一般有三个物镜。(2) 转换器：位于镜筒的下方，其上有3个孔，有的有 4个孔或 5个孔。不同规格的物镜分别安装在各孔上。(3) 载物台：载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔，使下面的光线可以通过。两旁有弹簧夹，用以固定标本或载破片。有的载物台上装有自动推物器。(4) 调节器： 镜筒旁有两个螺旋，大的叫粗调节器， 小的叫细调节器， 用以升降镜筒，调节物镜与被观察物体之间的距离。二 光学光学系统（1）目镜：一般使用的显微镜具有2— 3个目镜，其上刻有 “5×”、“10×”、“15×”(或“16×”)2 等数字及符号， 意即放大 5倍、10倍、15倍(16倍)。这三种透镜的焦距分别为50mm、25nn、16mm ，线视场分别为20mm、14mm、10mm。（2）物镜：物镜装在回转板上，可分为低倍物镜、高倍物镜和油镜三种。相应的放大倍数是 10×（5×）、 40×（50×）、 100×（90×），相应的工作距离是7.63mm、0.5mm、0.198mm，物镜上常标注数值孔径（N.A ）。使用低倍镜和高倍镜时，一般做活体观察，不进行染色。在观察原生动物时，低倍镜主要用来观察全部原生动物的种类和观察它的活动状态，而高倍镜则可以看清楚微生物的结构特征。油镜在大多数情况下是用来观察染色的涂片。（3）集光器集光器在载物台的下面，用来集合反光镜反射来的光线。集光器可以上下调整，中央装有光圈，可以调整光线的强弱。当光线过强时，应缩小光圈或把集光器向下移动。（4）反光镜反光镜装在显微镜的最下方，有平凹面反光镜。1.3.1.2 光学显微镜的分辨率与放大倍数显微镜的分辨率是指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。光学显微镜的分辨3 率受光干涉现象的限制。分辨率（最小可分辨距离）=1/2光波波长 /数值孔径（1-1）D= λ /2n ·sin( α /2 ) ...