大容量注射液密封系统 完好性验证方案 1. 概述 本次容器密封系统的完好性试验采用灌装大豆胰蛋白胨肉汤培养基，经压塞、扎盖、灭菌、微生物侵入试验，试验分为 2 组，A 组为正常微生物侵入试验，B 组为微生物挑战试验，检查产品无菌可靠性是否达到要求，并对试验结果进行分析研究。 2. 试验流程 培养基的配置灌装,压塞扎盖培养基灭菌70只带盖50只拧松铝盖20只确认培养基生长能力50只(A组)微生物侵入试验35只(B组)微生物侵入试验各2只（未侵泡）确认培养基生长能力无菌检测（A组）长菌分析原因无菌生长A组10只B组5只确认培养基生长能力营养试验合格试验有效确认试验合格与否营养试验合格试验有效营养试验合格试验有效倒立培养14天确认无菌培养7天或至阳性并鉴定菌为铜绿持续侵泡4h菌液浓度1×106 CFU/ml培养7天或至阳性并鉴定菌为铜绿培养7天或至阳性并鉴定菌为铜绿10只封口缺损 3. 验证内容 3.1 目的 证明灌装培养基的容器经压塞、扎盖、灭菌、微生物侵入试验后，保证无菌以确认大容量注射液密封系统的完好性。 3.2 试验样品的制备 3.2.1 在生产线上取足够量的输液瓶，灌装大豆胰蛋白胨肉汤培养基，使用自动压塞和压盖设备将容器密封。 3.2.2 将灌装好的容器经115℃、20 分钟灭菌。 3.2.3 从灭菌柜中取出试样，冷却，将每一试样倒转，使培养基与容器内表面充分接触，在30~35℃下竖放培养14 天。 3.2.4 小心拧松至少 50 个试样的铝盖，注意不要破坏其密封口。将拧松铝盖时不慎损坏容器密封性的所有试样剔除。按 3.2.3 培养样品。 3.2.5 挑选至少 10 个封口处缺损的容器，按 3.2.3 培养样品。 3.3 确定培养基促菌生长能力——营养性试验 3.3.1 所有试样培养14 天均不长菌时，随即取20 个带盖试样，每个试样内接种 1ml 的铜绿假单胞菌ATCC9027，菌液浓度：10~100CFU/1ml。 3.3.2 30~35℃下培养7 天，或培养至所有试样都呈阳性结果。 3.3.3 若 7 天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力可判为合格。 3.3.4 使用革兰染色和紫外灯下肉汤呈蓝绿色荧光的性质，来签订并确认试样容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌。 3.4 挑战菌悬浮液的制备 3.4.1 从铜绿假单胞菌ATCC9027 的新鲜斜面上取一整环培养基，分别接入含 10ml 无菌培养基的试管中，在30~35℃下培养16~18h。 3.4.2 将每管的培养物分别转入含 1000ml 相同培养基（SCDM/2）的容器中...
