广东省高教厅重点实验室－现代生物技术实验室实验教材基因工程技术实验指导(研 究 生 教 材 ) 华南农业大学现代生物技术实验室基因工程实验分室二零零五年二月编 者 的 话本实验指导是为广东省高教厅重点实验室之一的“现代生物技术实验室”开设的“基因工程原理和方法”而编写的。本课程主要面向广州石牌地区六所高校的研究生，也包括部分高年级本科生。该课程以实验为主，为保证学生在修读本课程时有较好的理论基础，要求所有修课学生预修“分子生物学”或“分子遗传学”。本课程实验采用了一个内容连贯的实验系统(用质粒载体克隆植物DNA片段 )，作为同学们掌握DNA体外重组基本技术的训练(实验一至实验七)。另外，根据本研究室多年教学、研究工作的经验，我们还把反映近年基因工程技术发展的PCR 、 Southern杂交技术等纳入实验内容，以保证学生修完本课程后能较快地开展相应研究工作，更好地适应未来研究工作的需要。本实验指导由庄楚雄、穆虹、易继财、姚涓、吴豪、张群宇、刘耀光、梅曼彤等老师参加编写，易继财老师负责指导书的编辑等工作。本实验指导为试用第三版，试用后我们将根据各校修课的情况和要求作进一步修改，敬请兄弟院校的同行多提宝贵意见。编者2005 年 2 月目录基因工程实验室学生守则3实验一碱裂解法抽提质粒 DNA 4实验二琼脂糖凝胶电泳 7实验三DNA 的酶切9实验四目的片段的回收11实验五DNA 的体外连接12实验六重组 DNA 的转化15实验七重组转化子的快速鉴定18实验八多聚酶链式反应 ( PCR ) 19实验九植物 DNA 的抽提21实验十基因组 DNA 的 Southern杂交分析24 附录 I. 各种试剂的母液配方28附录 II. 常用实验器具的清洗方法31主要参考书32 基因工程实验室学生守则1. 实验课前必须预习实验指导，了解实验原理和基本操作过程。2. 实验课不得无故缺席、迟到或早退。非课表规定的实验时间，应按任课老师的安排，准时来进行操作。3. 实验课时， 应自觉遵守课堂纪律，保持实验室的安静与清洁卫生，不得大声谈笑， 不得抽烟、随地乱丢纸屑、吐痰等。4. 实验前清点好仪器、用具与试剂，实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。公用试剂用毕，应立即盖严放回原处。勿使试剂、药品洒在实验台面和地面上。5. 实验中应严格遵守操作规程进行实验，细心观察实验现象，并如实记录实验结果。每个实验完成后，要写实验报告。6. 实验完毕，应清洗好当天所用的器皿和用具，整理好仪器与实验台...
