实验三酵母醇脱氢酶的提纯及其性质的研究醇脱氢酶（ ADH ）是生物体内重要的氧化还原催化剂之一，在生物催化、生物医学领域都有较为广泛的应用。生物体内的很多醇类代谢都是通过醇脱氢酶催化完成的。醇脱氢酶来源广泛，种类繁多，可按肽链长度分为短链、中链、长链醇脱氢酶，所含肽链氨基酸残基数分别为250、375 和 600~750，酵母醇脱氢酶（YADH ）是其中研究和应用最为广泛的一种。酵母醇脱氢酶以NAD+/NADH 为辅酶，可逆催化醇和醛/酮之间的氧化还原反应。酵母醇脱氢酶为四聚体，单个亚基肽链含347 个氨基酸残基，亚基相对分子质量为35 000。（一）酵母醇脱氢酶的提纯一、实验目的1. 学习和掌握醇脱氢酶提纯的原理和方法；2. 掌握醇脱氢酶活力的测定方法。二、实验原理以酵母为原料， 利用热变性、 有机溶剂沉淀蛋白质等方法，提取具有一定纯度的酵母醇脱氢酶。在提纯过程中，每经一步提纯处理，都需测定酶蛋白质含量和活力，并计算得比活力(本实验中比活力=活力单位数 /mg 蛋白质 )。唯有比活力提高了， 才证明所用提纯措施有效，酶制剂的纯度提高了。醇脱氢酶的辅酶NAD （以 NAD 为辅酶的醇脱氢酶，它只作用于一级醇、二级醇和半缩醛脱氢酶， 动物醇脱氢酶还能催化环一级醇脱氢，酵母醇脱氢酶无此活力。另有以 NADP为辅酶的醇脱氢酶，它只作用于一级醇。），它能催化乙醇脱氢变成乙醛，脱下的氢则使NAD +还原。CH3CH2OH+NAD+→ CH3CHO+NADH+H+ 当有过量的醇存在时，NAD+ 被还原的速度与酶活力成正比，酶活力愈高，单位时间产生的 NADH愈多。 NADH对 340nm 紫外线有较强吸收，NAD+ 无此能力，因此可用测定A 340nm 的方法测得反应体系中NADH 含量，从而得知酶活力的大小。0 本实验用 Folin- 酚试剂法测定蛋白质含量三、实验材料、仪器和试剂1．实验仪器：（1）干酵母粉：将鲜酵母分散成小块，放在搪瓷盘吹干。干燥后，研磨成粉末。（2）烧杯（3）吸管 0.1ml 、0.5ml、 1ml、 2ml、5ml （4）容量瓶（5）试管（6）量筒（7）水浴锅（8）台天平（9）电子天平（10）离心机（ 5000r/min ）（11）722 型分光光度计（12）UV-900 型紫外可见分光光度计2．实验试剂：（1）3mol/L 乙醇溶液：量取无水乙醇（比重：0.789，相对分子质量： 46.07）174.6ml ，加蒸馏水稀释至1000ml。（2）0.06mol/L 焦磷酸钠溶液（pH8.5）：称取焦磷酸钠（Na 4P2O2·10 H2O）22.56g，溶于蒸馏水，稀释至1000ml。（3）0.0015mo...
