青霉素发酵效价的生物学测定

1 青霉素发酵效价的生物学测定一、实验目的1、了解青霉素作用的机理2、了解青霉素效价的生物学测定的原理3、掌握管碟法测量抗生素效价的方法4、掌握青霉素摇瓶培养的操作流程二、实验原理（一）、青霉素及作用的机理1. 抗生素：是某些微生物在其代谢过程中所产生的，能抑制或杀灭其他病原微生物的化学物质；是细菌、真菌、放线菌等微生物的代谢产物。主要从微生物的培养液中提取，能杀死或抑制其他病原微生物。在低浓度即可对某些生物的生命活动有特异一直作用的化学物质的总称。2. 青霉素天然青霉素系从青霉菌的培养液中提取获得，主要含有：青霉素 F、G、X、K和双氢 F 五种。其中以青霉素G(又名苄青霉素 )的作用最强，性质较稳定，产量亦较高。青霉素 G的结构：2 青霉素钾、钠的结构：NSOHNCOOKCH 3CH 3OCCH 2青霉素钾盐、钠盐的性质：遇酸、碱或氧化剂等迅速失效。有引湿性；在水中极易溶解，乙醇中溶解，在脂肪油或液状石蜡中不溶。水溶液在室温放置易失效； 20 万 IU/ml 青霉素溶液于 30 ℃ 放置 24h，效价下降 56%，青霉烯酸含量增加200 倍，临床应用时要新鲜配制。（所以只有粉制剂， 没有注射液， 用时用注射用水稀释；如使用不完，放置不要过久） 。3. 青霉素作用机理?使细菌细胞壁缺损 ( 黏肽) ，菌体内的高渗透压使细胞外面的水分不断地渗入菌体内，引起菌体膨胀变形，加上激活自溶酶，使细菌裂解而死亡 .G+ ( 二) 青霉素效价的生物学测定的原理1. 效价: 是评价抗生素效能的标准， 也是衡量抗生素活性成分含量的CONSOHNCOOHCH 3CH 3CH 23 尺度微生物鉴定法：以抗生素对微生物的杀伤力或抑制程度为指标来衡量抗生素效价的方法理化方法：根据抗生素的结构特点，利用其特有的化学或物理性质及反应而进行的抗生素活性表示方法：抗生素的活性以效价单位来表示; 每 ml或每 mg中含有某种抗生素的有效成分的多少，用单位 u 表示一个青霉素效价单位： 能在 50mL肉汤培养基中完全抑制金黄色葡萄球菌发育的最小青霉素剂量; 以 IU 表示1mg青霉素 G钠盐定为 1667 单位； 1mg青霉素 G钾盐为 1595单位( 三) 管碟法测量抗生素效价的方法1. 利用抗生素在培养基内的扩散渗透作用，将已知效价的标准品溶液与未知效价的被检品溶液在同样条件下加入已放置在含有高度敏感性的试验菌的培养基上的小管内2. 培养后，在抗生素扩散到达的适当范围内，产生了透明的抑菌圈。不同浓度的抗生素， 抑菌圈...