乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书

乙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书-模板1. 目的采用 PCR 技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的乙型肝炎病毒核酸的定量检测，或用于乙型肝炎的辅助诊断和抗病毒药物治疗中的疗效观察。2. 范围适用于乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）定量检测（PCR-荧光探针法）。3. 职责3.1 操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。3.2 专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。3.3 实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。4. 原理采用荧光 PCR 技术，以 HBV 基因组中相对保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，在样品核酸纯化之后，通过荧光定量PCR 对 HBV DNA 进行扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值(CT)实现对未知样品的检测。另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。5. 样品要求5.1 适用样品类型：血清或血浆。5.2 样品采集：5.2.1 血清用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血 2ml，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂），室温（22-25℃）放置 30-60min 血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm 离心5min，吸取上层血清，转移至 1.5ml 灭菌离心管。5.2.2 血浆用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血 2ml，注入含 EDTA（乙二胺四乙酸二钠）抗凝剂的真空采血管，立即轻轻颠倒混匀 5-10 次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min 后分离血浆于无菌的 1.5ml灭菌离心管。5.3 样品保存和运送使用专用样品 0℃冰壶送检，温度约维持在4℃左右。分离后的血清或血浆可立即用于测试，也可以保存于-20℃待测，保存期为 6 个月。5.4 拒收样品：拒绝重度溶血样品、肝素抗凝的血浆。6. 仪器和试剂6.1 仪器AB7500 核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。6.2 试剂生产厂家：中山大学达安基因股份有限公司产品标准批号：YZB/国 7265-2013线性范围：100 IU/ml-5×108 IU/ml最低检出限及定量限：最低检出限浓度为 30 IU/ml，最低定量浓度为 100 IU/ml。试剂各组分见表 1：表 1试剂盒组分表组 分 名 称核酸提取试剂DNA 提取液Ⅰ阴性质控品HBV 强阳性质控品HBV 临界阳性质控品质控品及阳性定量参考品HBV 阳性定量参考品（2.0×106 IU/ml）HBV 阳性定量参考品（2.0×105 IU/ ml）HBV 阳性定量参考品（...