第七讲 噬菌体载体与柯斯载体 吴 乃 虎 中国科学院遗传与发育生物学研究所 2 0 0 5 年 8 月 2 目 录 一、噬菌体的一般问题 1．何谓噬菌体 2．噬菌体效价测定与双层平板法 3．噬菌体的生命周期 4．噬菌体的溶源生命周期 5．超感染免疫 6．溶源性的诱发 7．Campbell 模型 二、噬菌体载体 1．噬菌体的生物学概述 2．噬菌体载体的构建 3 (1) 噬菌体载体构建的基本原理 (2) 插入型载体 (3) 替换型载体 3．噬菌体载体的改良 (1) Sp i-正选择的噬菌体载体 (2) 具有内删除特性的噬菌体载体 4．重组体DNA 分子的体外包装 (1) 重组体DNA 的转染作用 (2) 噬菌体的体外包装 5．噬菌体DNA 的包装限制问题 (1) 包装限制的概念 (2) 包装限制与噬菌体的克隆能力 (3) 包装限制的生物学意义 6．重组体分子的选择方法 4 (1) cI 基因功能选择法 (2) lacZ 基因功能选择法 (3) Sp i-选择法 三、柯斯质粒载体 1．柯斯质粒的定义及其构建 (1) 噬菌体的克隆能力 (2) 柯斯质粒载体定义 (3) 柯斯质粒p HC79 的构建 (4) 柯斯质粒克隆能力及其组成 2．柯斯质粒载体的特点 3．柯斯质粒载体的改良 4．柯斯克隆 (1) 定义 (2) 理论依据 5 (3) 柯斯质粒包装条件 (4) 柯斯克隆程序 (5) 柯斯克隆的优点 5．柯斯克隆的改良 (1) 柯斯克隆的局限性及其克服办法 (2) Ish-Horowicz-Burke 克隆方案 (3) Bates-Swift 克隆方案 6 噬菌体载体与柯斯质粒载体 一、噬菌体的一般问题 1．何谓噬菌体？ (1)定义 噬菌体英文名为Bacteriophage，简称phage，来源于希腊文“phages”，系指吞食之意，乃是一类细菌病毒的总称 需要指出的是，“phage”这个英文单词既是单数又是复数形式。作单数使用时是指一个噬菌体，如试管中含 1 个 T4 phage；而用作复数使用时，则是指同一种噬菌体的众多颗粒，如试管中含有上百个的 T4 phage。 “phages”是噬菌体的复数词，是指多种不同的噬菌体。例如：试管中含有 T4 和 T7 等多种 phages。 (2)噬菌体的核酸类型及结构 *1.与质粒相比，噬菌体的结构显然要复杂得多，但与细菌或真 7 核细胞相比，则显得十分简单。它的DNA 分子中除了复制起点之外，还编码着外壳蛋白质的基因。 噬菌体的核酸最常见的是双链线性DNA、双链环形 DNA、单链环形 DNA、单链线性DNA 及单链RNA 等多种形式。 *2.不同的噬菌体...
