3D 多 细 胞 肿 瘤 球 的 培 养 原 创 2017-04-20 医 生 科 研 助 手 3D 多 细 胞 肿 瘤 球 是 在 体 外 应 用 组 织 培 养 方 法 使 肿 瘤 细 胞 以 多 细 胞 集 聚体 的 形 式 生 长 成 为 具 有 三 维 结 构 的 球 体 。 与 传 统 的 2D 贴 壁 细 胞 培 养 模 型 相 比 ， 3D 多 细 胞 肿 瘤 球 可 以 通 过 模 拟 三 维 细 胞 网络 、 细 胞 与 基 质 、 细 胞 与 细 胞 之 间 的 相 互 作 用 ， 从 而 更 加 贴 近 肿 瘤 组 织 中 相 应 的病 理 生 理 特 征 。 因 此 ， 3D 多 细 胞 肿 瘤 球 培 养 模 型 已 经 逐 渐 应 用 于 干 细 胞 培 养 和 分 化 、癌 症 研 究 、药 物 和 毒 性 筛 选 及 组 织 工 程 等 特 定 应 用 中 。 虽 然 3D 多 细 胞 肿 瘤 球 模 型 具 有 更 显 著 的 实 体 肿 瘤 生 理 相 关 性 ，但 是 与 2D 贴 壁 细胞 培 养 模 型 相 比 ， 获 得 大 量 相 对 统 一 的 3D 多 细 胞 肿 瘤 球 模 型 需 要 一 系 列 的 培 养过 程 和 表 征 手 段 。 本 文 利 用 Liquid Overlay 的 制 备 方 法 ， 以 乳 腺 癌 细 胞 MDA-MB-231 和 MCF-7 为 模型 制 备 3D 多 细 胞 肿 瘤 球 并 采用 倒置显 微镜、 激光共聚 焦显 微镜和 环境扫描电镜对 其进行详细 表 征 。 1 实 验前准备 工 作 1.提前24 h 取12 mL DMEM 和 RPMI 1640 完全培 养 基 （含10%FBS， 下同）于 50 mL离心管内， 置于4℃冰箱中 预冷； 2. 将分 装好的Matrigel 基 质 胶提前24 h 从 -20℃放入 4℃， 使 其融化 成 液体 状态； 3. 将无菌的1 mL 移液器枪头放入无菌 50 mL 离心管内， 置-20℃冰箱预冷。 2 琼 脂 糖 包 被 96 孔 板 1. 准 确 量 取 6 mL RPMI 1640培 养 基 （ 或 DMEM 培 养 基 ） 于 2 个 10 mL 的 注 射 玻璃 瓶 内 ， 加 入 90 mg 琼 脂 糖 ， 盖 塞 后 放 入 80℃ 的 水 浴 锅 内 加 热 溶 解 30 min； 2. 加 热 结 束 后 ， 将 注 射 瓶 放 入 灭 菌 锅 内 ， 115℃...
