BPG层析柱标准装柱流程规范

BPG300 层析柱标准装柱流程规范 SOP-BPG-001 1 操 作 标 准 目的：为了使BPG300 层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作规范。 范围：配合 Ä KTA process 系统进行有效的蛋白质纯化操作。 责任人：层析工序操作人员 标准操作程序： 1 基本术语概念 填料因子（Packing Factor, PF）：指在在装柱过程中，用低流速（如 60cm/h）对填料进行沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度（柱高）的比值， GEHC 生产的各种常见填料的PF 参见《GEHC AxiChrom 300-1000 columns User Manual 28-9562-89 Edition AA》； 线性流速（linear flow rate）：单位时间内液体流经的直线距离，常用 cm/h 表示； 体积流速（volume flow rate）：单位时间内液体流经的空间容积，常用 ml/min表示； BPG300 层析柱标准装柱流程规范 SOP-BPG-001 2 换算： 2 准备工作 2.1 检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平（用水平仪矫正），是否清洁（如有污染应进行清洗）。 2.2 确定所用填料及其特性、浓度等 以 DEAE Sepharose Fast Flow 填料为例，其填料因子（PF）为 1.15，新填料（slurry）浓度为 75%（保存于 20%乙醇中），耐压 3bar。 2.3 确定放大后的工艺参数 以 XX 生化制药股份有限公司的放大工艺为例， 中试工艺参数： 柱高 h=10cm；体积流速 v1=3ml/min；柱内径 d=1.6cm. 即，线性流速 v2=v1/s 柱=3/(3.14×0.82) cm/min=1.5 cm/min； 样品与填料接触时间 t=h/v2=10/1.5min=6.67min； 在工艺的线性放大中 h、v2 和 t 均不变，则可保证样品出峰的位置（洗脱时间）和形状不变。 使用BPG300 层析柱进行放大的工艺参数： 装柱体积 V柱= S柱h=3.14×1.52×1L=7L； 装柱需要 slurry 体积 Vslurry=V柱×PF/Cslurry 以 DEAE Sepharose Fast Flow 为填料， 则，Vslurry=7×1.15/0.75L=10.73L； 装入柱中的slurry 高度 Lslurry=Vslurry/S柱=10.73/(3.14×1.52)dm=1.52dm=15.2cm. 3 管路安装 3.1 层析柱管道和配件安装 3.1.1 卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或 20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O 型圈； 3.1.2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二 BPG300 层析柱标准装柱流程规范 SOP-BPG-001 3 通阀...