cDNA文 库 的 构 建 基 因 文 库 的 构 建 是 现 代 生 命 科 学 研 究 中 的 一 项 重 要 技 术 。 自 70年 代 初 首 例 cDNA克 隆 问 世 以来 ， 已 用 构 建 和 筛 选 cDNA文 库 的 方 法 克 隆 了 很 多 基 因 。 通 过 构 建 cDNA文 库 能 直 接 分 离 到 生 命 活动 过 程 中 的 一 些 调 控 基 因 及 了 解 这 些 基 因 所 编 码 的 蛋 白 质 的 相 互 作 用 关 系 ． 因 此 cDNA文 库 的 构建 是 基 因 克 隆 的 重 要 方 法 之 一 ， 从 cDNA文 库 中 可 以 筛 选 到 所 需 的 目 的 基 因 ， 并 直 接 用 于 该 目 的基 因 的 表 达 。 它 是 发 现 新 基 因 和 研 究 基 因 功 能 的 工 具 。 1.cDNA文 库 构 建 的 原 理 真 核 生 物 基 因 的 结 构 和 表 达 控 制 元 件 与 原 核 生 物 有 很 大 的 不 同 。真 核 生 物 的 基 因 是 断 裂 的 ，在 基 因 最 后 产 物 中 表 达 的 编 码 序 列 （ 外 显 子 ） 被 非 编 码 序 列 （ 内 含 子 ） 分 隔 开 ， 需 经 RNA转 录 后加工 过 程 才使编 码 序 列 拼接 在 一 起。 真 核 生 物 的 基 因 不 能 直 接 在 原 核 生 物 中 表 达 ， 只有 将加工成熟的 mRNA经 逆转 录 合成互 补的 DNA（ complementary DNA,cDNA） 接 上原 核 生 物 表 达 控 制 元 件 ，才能 在 原 核 生 物 中 表 达 。 而且， 真 核 细胞的 基 因 通 常只有 一 小部分 进行表 达 ， 由于 mRNA的 不 稳定性，对基 因 表 达 和 有 关 mRNA都常通 过 对其cDNA来 进行研 究 。为分 离 cDNA克 隆 或研 究 细胞的 cDNA谱， 需 要 先构 建 cDNA文 库 。 所 谓cDNA文 库 是 指细胞全部mRNA逆转 录 成cDNA并 被 克 隆 的 总和 。 cDNA文 库 应包含 的 克 隆 数目 可 由以 下公式来 计算： N=ln(1-p)/ln(1-1/n) 式中 ：N－cDNA文 库 所 包含 的 克 隆 数目 ； P－低丰度cDNA存在 于 库 中 的 概率， 通 常要 求其大 于 99％； 1/n－每一 种低丰度mRNA占总mRNA的 分 数。 2....
