FISH 简介 荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization, 简称 FISH)由于其直观, 快速, 敏感性高和方便灵活越来越得到广泛应用, 尤其是在血液学领域中. 因为白血病标本比较容易取得和制备, 不同类型的白血病又往往有其特异的染色体异常, FISH 在白血病诊断, 治疗监测, 预后估计和微小残留病检测等诸方面都正成为不可缺少的重要手段. FISH 的基本原理很简单, 就是标记了荧光的单链 DNA(探针)和与其互补的 DNA(玻片上的标本)退火杂交, 通过观察荧光信号在染色体上的位置来反映相应基因的情况. FISH 探针按标记方法可分为直接标记和间接标记: 用生物素(biotin)或地高辛(digoxingenin)标记称为间接标记, 杂交后需要通过免疫荧光抗体检测方能看到荧光信号, 因而 步骤较多, 操作麻烦, 其优点是在信号较弱或较小时可经抗原抗体反应扩大; 直接用荧光素标记 DNA 的方法称为直接标记. 由于直接标记的探针杂交后可马上观察到荧光信号, 省去了烦琐的免疫荧光反应, 不再需要购买荧光抗 体, 也由于近年来荧光互的亮度和抗淬灭性的不断改进和提高, 直接标记的荧光探针越来越成为首选, 采用多种不同颜色的荧光, 方便在同一标本上同时检测多钟异常. 其荧光强度 和信号大小都易于在普通荧光显微镜下观察, 操作过程中也不需要严格避光, 使FISH 过程变得简便而易于操作. FISH 并不能取代传统的白血病 MCI 诊断, 但它却能使MIC 分型更为准确和深入. , MIC 即细胞形态 学(M), 免疫学和细胞遗传学(C), 三者结合对白血病进行分型诊断, 对不同类型的白血病采用不同治疗方案手段. 随着人们对白血病的不断认识, 仅进行MIC 分型不够全面, 还要加上对白血病的分子(M)诊断, 成为 MICM 分型. FISH 就是连接细胞遗传学和分子生物学的桥梁. FISH 流程 仪器设备 1、 医用微波炉； 2、 水浴锅； 3、 OLYMPUS BX51 荧光显微镜； 4、 OLYMPUS DP11 数字显微照相机。 FISH 试剂 （1）1×PBS：由 10×PBS 溶液稀释而成，储存于 4℃； （2）20×SSC（pH7.0）； （3）2×SSC，由 20×SSC 溶液稀释而成； （4）25mg/ml 蛋白酶 K 消化液。 （5）变性液(70％甲酰胺+2×SSC，pH7.0)： 4ml 20×SSC； 8ml 蒸馏水； 28ml 甲酰胺。 每次新鲜配制。 （6）杂交后洗涤液： 20×SSC 4ml； 蒸馏水16ml； 甲酰胺 20ml。 每次新鲜配制。调节 pH 前升至室温。 实验步骤 1、脱蜡...
