HPLC使用注意事项

色谱柱使用注意事项 1 . 色谱柱使用过程中切忌干柱子、进空气、反向使用 连接色谱柱时候，必须反复确认通路，即由进样阀连接色谱柱的进样口。 色谱柱使用过程中应该计算好当天所用流动相，配制足够的流动相，以防干柱。 使用后应该从高效液相仪器上拆除，并用柱塞堵严。 2 . 判断是否冲洗完成，基于以下几点 (1).在样品测试前，知道\测试过色谱柱的一些性能； (2).在样品测试过程中，样品的洁净纯度以及进样情况影响色谱柱的冲洗 (3).一般是以柱压来衡量 (4).无固定冲洗时间，具体可参考使用说明书，一般是 10-20 倍柱体积或是约 30-60min冲洗时间 (5).冲洗溶液的选择：一般是以“相似相容”为原则 (6).使用保护柱能够延长色谱柱的使用寿命 色谱柱的使用和注意事项 色谱柱的正确使用和维护十分重要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。 ① 避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓(如前所述)。 ② 应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。 ③ 一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。 ④ 选择使用适宜的流动相(尤其是 pH)，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。 ⑤ 避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。 ⑥ 经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的 20 倍左右，即常规分析需要50~75ml。 下面列举一些色谱柱的清洗溶剂及顺序，作为参考：硅胶柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次冲洗，然后再以相反顺序依次冲洗，所有溶剂都必须严格脱水。甲醇能洗去残留的强极性杂质，已烷使硅胶表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次冲洗，再以相反顺序依...