精品文档---下载后可任意编辑DC/B16 融合细胞诱导 T 细胞特异性 CTL 的基础实验讨论的开题报告一、讨论背景及意义T 细胞免疫治疗已成为当前癌症治疗领域一个备受关注的讨论方向,检测、分离肿瘤特异性 CTL(细胞毒性 T 淋巴细胞)是其中的重要环节。传统的方法是采纳多肽+DCs(树突状细胞)或癌细胞等方式处理 T 细胞,使 T 细胞激发产生免疫反应,但是该方法存在着免疫特异性较低,且需要大量复杂的手段制备肿瘤特异性 CTL。为克服这些困难,一个新的策略就是采纳转基因技术将 DC 与肿瘤相关抗原在功能上进行融合,从而制造出可以诱导肿瘤特异性免疫反应的细胞。DC/B16 融合细胞是由BALB/c 小鼠 B16 黑色素瘤细胞和 DC 杂交后产生的融合细胞,具有 DC和肿瘤细胞的生物学特性,可激活 CD8+T 细胞并诱导肿瘤细胞特异性CTL 的产生,其方法获得的 CTL 可以克服传统肿瘤免疫治疗中存在的问题,已成为当前讨论的热点。二、讨论目的本讨论的目的是通过使用 BALB/c 小鼠 B16 黑色素瘤细胞和 DC 进行杂交实验,制备出 DC/B16 融合细胞并在体外进行培育,然后通过检测细胞对 T 细胞的诱导效应和活性,以及监测细胞对肿瘤特异性 CTL 的激活效果,验证 DC/B16 融合细胞作为 T 细胞肿瘤免疫治疗的应用可行性,为基础讨论和临床应用提供理论依据。三、讨论方法1. 实验动物:选用 BALB/c 小鼠。2. 细胞选择和分离:从 BALB/c 小鼠体内采集 DC 和 B16 黑色素瘤细胞,进行体外分离并通过筛选设置纯化后的 DC 和 B16 黑色素瘤细胞。3. 细胞杂交和鉴定:采纳聚乙二醇(PEG)法将纯化后的 DC 和B16 黑色素瘤细胞进行杂交,筛选出 DC/B16 融合细胞并进行 PCR、酶联免疫吸附实验(ELISA)等方法进行细胞鉴定。4. T 细胞处理和激活:采纳小鼠体内的 T 细胞进行体外处理,将 T细胞分离并进行免疫激活,并通过实验监察介导效应和活性的变化。5. 诱导肿瘤特异性 CTL 的检测:通过对处理后的 T 细胞进行鉴定和监测,并评价肿瘤细胞特异性 CTL 的活性,确保肿瘤细胞特异性 CTL 的诱导效率。精品文档---下载后可任意编辑6. 数据分析:采纳 SPSS 软件进行数据分析,相关实验数据做图表呈现。四、预期成果1. 成功制备出纯化的 DC 和 B16 黑色素瘤细胞。2. 制备 DC/B16 融合细胞并对融合细胞进行鉴定。3. 实验检测出制备的 DC/B16 融合细胞对 T 细胞诱导效应和活性的变化,以及对...