精品文档---下载后可任意编辑BL21(DE3)重组工程体系的建立和自剪切系统的探究的开题报告一、讨论背景及意义大肠杆菌是一种重要的真核细胞工程系统，广泛应用于蛋白质表达、功能性基因组学及高通量筛选等多个领域。BL21(DE3)重组工程菌系是其中最为常用的菌株之一，自身携带 T7 RNA 聚合酶和 λDE3 赖氨酸加入酰基转移酶（Lysogeny broth DE3 lysogen）等表达相关基因，适合于表达异源基因；但该系统存在不足，如在过表达少见氨基酸，如亮氨酸、色氨酸等时显著偏差，影响蛋白质的正确折叠。因此，建立BL21(DE3)自剪切系统，能弥补该系统的不足，在特定情况下表达更为困难的蛋白质，以及提高蛋白质表达量和专一性等方面具有不可忽视的优势，因此对 BL21(DE3)重组菌系的改良是一个重要的讨论领域。二、讨论目的和方法本讨论的主要目的是探究建立 BL21(DE3)自剪切系统，通过将自剪切元件 I1、I2 和 I3 插入 T7 转录起始位点的上游和下游，形成 I1-T7-I2-T7-I3，从而在外加 I1 启动子和 I3 启动子切割的作用下，实现重组蛋白质的特异表达和高水平表达；并在此基础上，通过 pET28a 载体构建自剪切蛋白表达载体，器培育体系的筛选和纯化等方法验证重组自剪切蛋白的功能。三、预期结果和意义估计通过本讨论的探究和实验验证，成功建立 BL21(DE3)自剪切系统，进一步提高该菌系的表达水平和表达专一性，并且该系统具有良好的重组蛋白表达能力，将为蛋白质表达技术的进展和重组蛋白质的高效表达提供更为有力的技术支持和理论指导。同时，本讨论还将促进基因工程技术在药物研发领域等相关领域的进展和应用。
