精品文档---下载后可任意编辑FBP17 基因真核重组质粒构建及其 L02 细胞表达的开题报告开题报告一、讨论背景转运蛋白作为细胞内物质转移的重要载体，在生命科学、生物技术等领域有着广泛的应用前景
FBP17 蛋白（formin-binding protein 17），在转运过程中具有重要的作用
讨论 FBP17 蛋白的结构和功能，对了解其在细胞内的调控机制具有重要意义，也有助于我们探究转运蛋白在细胞内的运输机制
本讨论旨在构建 FBP17 基因真核重组质粒，并将其转染到人肝癌细胞 L02 中，实现 FBP17 的表达
二、讨论目的1
构建 FBP17 基因真核重组质粒；2
转染 FBP17 基因重组质粒到 L02 细胞；3
实现 FBP17 在 L02 细胞中的高效表达
三、讨论内容1
FBP17 基因全长克隆：利用 PCR 方法扩增 FBP17 基因全长，将其插入真核重组质粒载体中；2
构建真核重组质粒：将 FBP17 基因克隆子插入真核重组质粒pCDNA3
1 中，获得 FBP17 基因真核重组质粒；3
体外转染 L02 细胞：将 FBP17 基因真核重组质粒转染到人肝癌细胞 L02 中，分别采纳不同浓度的真核重组质粒进行转染，并使用荧光显微镜进行检测；4
蛋白表达检测：利用 Western blotting 技术检测 L02 细胞中FBP17 蛋白的表达情况
四、讨论方法1
PCR 扩增：设计 FBP17 基因引物，采纳 PCR 方法从人类胃癌细胞系 AGS 中扩增 FBP17 基因的全长；2
克隆：将扩增获得的 FBP17 基因克隆子与真核重组载体pCDNA3
1 连接，获得 FBP17 基因真核重组质粒；精品文档---下载后可任意编辑3
体外转染：采纳 Lipofectamine 2000 试剂将 FBP17 基因真核重组质粒转染到 L02
