非小细胞肺癌细胞株ASPP1和ASPP2表达的检测的开题报告

精品文档---下载后可任意编辑非小细胞肺癌细胞株 ASPP1 和 ASPP2 表达的检测的开题报告1.讨论背景：非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer, NSCLC）是一种常见的恶性肿瘤，占所有肺癌的 80％至 85％，其 5 年生存率不到 20％。因此，讨论 NSCLC 的发病机制和治疗方法具有重要的临床应用价值。ASPP1（Apoptosis-Stimulating Protein of p53-1）和 ASPP2（ASPP Binding Protein of p53-2）是 p53 的新调节因子，这两种因子共同协作对 p53 的功能起到重要的调节作用。在某些肿瘤中，ASPP1 和ASPP2 的表达被改变，从而改变了 p53 的调节作用，进而促进肿瘤的发生和进展。因此，检测 NSCLC 细胞中 ASPP1 和 ASPP2 的表达水平，有助于深化了解 NSCLC 的发病机制，并为治疗 NSCLC 提供新的靶点和途径。2.讨论目的：通过检测 NSCLC 细胞株 ASPP1 和 ASPP2 的表达水平，探究 ASPP1 和 ASPP2在 NSCLC 发病机制中的作用，为 NSCLC 的治疗提供新的靶点和途径。3. 讨论方法：3.1 细胞培育选取 NSCLC 细胞株作为讨论对象，分别将其分为实验组与对比组。实验组采纳siRNA 干扰技术抑制 ASPP1 和 ASPP2 的表达，对比组细胞不进行任何处理。接种 6孔板中，用含 10％胎牛血清（FBS）的 DMEM 培育细胞，并放置于 37°C，5％CO2的恒温培育箱中培育。3.2 蛋白质提取细胞达到 70%一 80%的密度时，从培育皿中取出并用 PBS 洗涤 3 次。用 RIPA溶液（含有 PMSF）溶解固体细胞，并通过振荡器震荡 20 分钟，离心 6000 rpm，4°C，10 分钟。将上清中的蛋白质移至离心管中，进行摇晃诱发，再离心 10分钟。将上清（蛋白质）收集起来，储存于-80°C 中。3.3 蛋白质浓度测定利用 BCA 蛋白质定量实验进行蛋白质浓度测定。3.4 蛋白质印迹法 Western blot将 20μg 的蛋白质样品根据 molecular weight size ，负电极向前，电泳成蛋白质条带，并迁移至 nitrocellulose 膜上。将膜在 TBST 中预先处理，并加入特定的一抗，留置于 4°C 一过夜。于第二天用 TBST 洗膜，并加入二抗，及 IgG 的辣根过氧化物酶联物，将膜进行染色并再次洗膜。最终用图像分析器分析膜。4.讨论预期成果：精品文档---下载后可任意编辑通过检测 NSCLC 细胞株 ASPP1 和 ASPP2 的表达水平，探究 ASPP1 和 ASPP2在 NSCLC 发病机制中的作用。讨论估计可以发现 ASPP1 和 ASPP2 在 NSCLC 的发生和进展中具有重要的作用，有望为 NSCLC 的治疗提供新的靶点和途径。