HPLC 故障排除 症状类型 可能的原因 解决方案 基线噪声大 随机性-污染物积聚 冲洗柱;净化样品;使用HPLC 级溶剂 连续性-检测器灯故障 更换紫外灯(寿命为1000 小时) 偶然性-外部电气干扰 使用LC 系统专用稳压器 样品量过大 进样量应为流动相进样量的1/6 双峰 样品量过大 进样量应为流动相进样量的1/6 进样溶剂过强 使用较弱的进样溶剂或流动相 滤芯堵塞 更换并使用0.5μ m 孔隙率的在线过滤器 柱有空隙或气沟 用玻璃珠或填料填充空隙;重填柱 进样器流路不通畅 更换进样器转子 柱头有空隙 使用填料或玻璃珠填充柱顶部 柱上样品超载 使用更高负载量的固定相;增加色谱柱内径;减少样品量 单峰-存在干扰性组分 净化样品;预分离 拖尾峰 开始出双峰 请参见双峰 存在未扫的死体积 减少接头的数量;确保进样器密封垫紧密;确保接头正确固定 碱性化合物-硅醇相互作用 换成聚合物固定相 碱性物质-硅醇相互作用 使用更强的流动相或添加竞争碱(例如,三甲胺) 硅胶基-柱降解 使用特种色谱柱;聚合物柱或空间位阻 峰展宽 进样量过大 降低进样溶剂的强度以集中溶质 进样阀中的峰扩散 在进样前/后引入气泡以减少扩散 数据系统的采样速率过低 增大采样 检测器时间常数低 调节时间常数使之与峰宽匹配 流动相粘度过高 提高柱温 检测器流通池容积过大 使用尽可能小的池容积(系统中无热交换器) 注射器体积过大 减少进样量 保留时间长 使用梯度洗脱或较强的流动相 压力波动 单向阀泄漏 更换单向阀 泵密封垫泄漏 更换泵密封垫 微粒积聚 过滤样品；在线过滤器;过滤流动相 压力渐增 微粒积聚 过滤样品；在线过滤器;过滤流动相 水 /有机系统-缓冲液沉淀 测试缓冲液-有机混合物;确保兼容性 保留时间超出总渗透体积 体积排阻-特异性相互作用 添加流动相改性剂或更改溶剂 保留时间不断变动 柱温不断变化 使柱恒温;绝缘;保证实验室温度恒定 平衡时间不足以适应梯度洗脱要求,或梯度洗脱流动相起变化 确信在溶剂改变或梯度结束后至少10 个柱容积通过色谱柱 流动相组分选择性蒸发 减少氦气的剧烈脱气;保持溶剂贮器盖好;制备新的流动相 缓冲能力不足 用 >20mM 浓度的缓冲液 在线流动相混合不一致 保证梯度系统输送恒定组成;与手动制备流动相核对 污染积聚 冲洗色谱柱以去除污染物 最初几次进样-吸附在活性部位 用浓样品进样冲洗柱,使其处于正常状态 保留时间逐渐缩短 流速在增加 检查...
