中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则及其在《中国药典》(20重点

课程论文中药材 DNA 条形码分子鉴定法指导原则及其在《中国药典》(2015 年版中的应用药学(药物分析方向 2012 级指导教师:高晓霞2015 年 11 月摘要:中药材存在多基原物种及同名异物、同物异名等问题,鉴于传统基原鉴定、性状鉴定、显微鉴定和理化鉴定方法存在局限性,为保证中药材临床应用安全、准确、有效,有必要增加中药材 DNA 条形码分子鉴定法。如今分子生物学技术在中药材鉴定领域的应用已逐步深入。《中国药典》2010 年版收载了乌梢蛇饮片、蕲蛇饮片、川贝母药材的 DNA 分子鉴定方法,而《中国药典》2015 年版收载了“中药材 DNA 条形码分子鉴定法指导原则”,DNA 条形码分子鉴定法是利用公认的相对较短的 DNA 序列来进行物种假定的一种分子生物学技术,是传统形态鉴别方法的有效补充。这标志着中药材的分子鉴定由实验室科研层面进入国家标准的应用层面。关键词:中药材;DNA;鉴定;指导原则一、中药材 DNA 条形码分子鉴定指导原则[1]1.1 定义及原理该鉴定方法主要适用于中药材（包括药材、药材粉末及部分药材饮片及基原物种的鉴定。DNA 条形码分子鉴定法是利用基因组中一段公认的、相对较短的 DNA序列来进行物种鉴定的一种分子生物学技术,是传统形态鉴别方法的有效补充。由于DNA 序列是由腺嘌吟（A、鸟嘌吟（G、胞嘧啶（C、胸腺嘧啶（T4 种碱基以不同顺序排列组成,因此一定长度 DNA 序列能够区分不同物种。中药材 DNA 条形码分子鉴定指导原则通过对大样本量中药材进行 DNA 条形码分子鉴定研究,建立以 ITS2 为核心,psbA-trnH 为辅的植物类药材 DNA 条形码鉴定体系和以 COI 为主、ITS2 为辅的动物类药材 DNA 条形码鉴定体系。1.2 方法与步骤中药材 DNA 条形码分子鉴定法主要包括供试品处理、DNA 提取、PCR 扩增、测序、序列拼接及结果判定,以下内容详细说明各流程中的主要原理及注意事项。1.2.1 供试品处理除特殊标明外,药材使用 75%乙醇擦洗表面后晾干,称取 10~100Mg2+备用。1.2.2 DNA 提取 DNA 的提取包括破碎细胞壁、释放 DNA,DNA 的分离和纯化,DNA 的浓缩、沉淀与洗涤等基本步骤,目前常用试剂盒法,包括植物基因组 DNA 提取试剂盒和动物组织/细胞基因组 DNA 提取试剂盒。由于植物类中药材种类繁多,可根据所研究中药材的具体情况对提取方法加以改进。植物细胞内含有大量次生代谢产物,如多糖、多酚等,这些物质在提取 DNA 的过程中与 DNA 共沉淀,形成黏稠的胶状物难以溶解或产生褐变...