慢病毒使用操作手册

慢病毒使用操作手册： 1 慢病毒使用操作 2 慢病毒安全使用规范 3 悬浮细胞感染方法概要 4 相关专业术语(详情可参考公司网站FAQ) 5 细胞培养器皿的相关参数 1、慢病毒使用操作手册 1.1 慢病毒的储存与稀释: 1.1.1 病毒的储存：用户收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂 时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口） A． 病毒可以存放于-80℃ 6 个月以上；但如果病毒储存时间超过 6 个月，我们建议在 使用前需要重新滴定病毒滴度 B． 反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度 10%；因此在病毒使用过程中 应仅尽量避免反复冻融，为避免反复冻融我们强烈建议客户收到病毒后按照每次的使用量 进行分装。 1.1.2 病毒的稀释：用户需要稀释病毒时，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用培养目的细 胞用PBS 或无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)混匀分装后4℃保存(请尽量 在三天内用完) 分装后使用。 1.2 慢病毒用于体外（In Vitro）实验：感染培养原代细胞和建系 细胞 1.2.1 慢病毒对各种细胞和组织的亲嗜性不同，用户使用Invabio 提供的慢病毒之前可以通过 查阅相关文献，了解慢病毒对您的目的细胞的亲嗜性，感染复数（MOI 值）以及在体（In Vivo）注射所需要的病毒量。如果没有相关文献支持，可以通过感染预实验得到合适的感染复数（MOI 值）（使用24 孔板检测病毒对目的细胞的亲嗜性） 1.2.2 慢病毒感染目的细胞预实验 1.2.2.1 慢病毒感染目的细胞预实验注意事项 A．测定慢病毒对目的细胞的亲嗜性时，需要同时设置对慢病毒亲嗜性较高的细胞(HEK293T，Hela）作为平行实验的对照细胞。 B． 在进行慢病毒感染实验时,可以用完全培养基（培养目的细胞用）稀释；理论上，含有 血清，双抗或者其他营养因子的完全培养基不影响慢病毒的感染效率。 C． Invabio 提供的病毒单位为 TU/ml, 即每毫升中含有具有生物活性的病毒颗粒数。如： 病毒滴度为>1X108 TU/ml 即每毫升病毒液中至少含有 1X108 个具有生物活性的慢病毒颗粒。 1.2.2.2 以24 孔培养板为例，进行目的细胞和 HEK293T 细胞的感染预实验 实验前按照不同的MOI 设置不同的感染孔，并根据 MOI 和细胞数量计算所需要的病毒量，如 有必要可以使用PBS 溶液或者无血清培养基稀释病毒原液 第一天，准备细胞：在24 孔培养板接种若干孔，每个孔内接种 ...