大肠杆菌(E.coli)是使用最早的表达系统，其显著优点是易于操作，产量高，成本低，但由于用E.coli 生产的蛋白质药物因缺乏糖基化而在人体内易被降解，因此它的药放大大降低。此外，它还存在易产生内毒素和包涵体的问题。 CHO 细胞属于成纤维细胞，既可以贴壁生长。也可以悬浮生长。容易发生基因突变，也较易进行基因转染，是良好的哺乳动物基因表达宿主细胞，代表性细胞有二氢叶酸还原酶（dihy drofolate redu ctase）营养缺陷型突变细胞株（CHO/dhfr-）、转染谷氨酰胺合成酶（Glu tamine sy nthetase,GS ）基因的GS-CHO 细胞。 二 氢 叶 酸 还 原 酶 是 真 核 细 胞 核 苷 酸 生 物 合 成 过 程 中 起 着 重 要 作 用 的 一 种酶 ， 是 常 用 的 遗 传 选 择 标 记 之 一 ， 它 可 催 化 二 氢 叶 酸 还 原 成 四 氢 叶 酸 。 对 于 dhfr 突 变 体 细 胞 而 言 ， 由 于 不 能 够 合 成 四 氢 叶 酸 ， 阻 断 了 正 常 核 酸 代 谢 途 径 ， 因 此 不能 在 常 规 培 养 基 上 生 长 ， 但 若 在 培 养 基 中 加 入 次 黄 嘌 呤 （ hy pox anthine） 和 胸 苷 （ thy midine），则 突 变 体 细 胞 可 以 借 助 核 苷 酸 的 补 救 合 成 途 径 维 持 生 长 。利 用 dhfr 基 因 进 行 筛 选 时 ， 首 先 将 重 组 DNA 分 子 导 入 dhfr- 表 型 的 受 体 细 胞 ， 然 后 撤 除 原培 养 基 中 的 的 次 黄 嘌 呤 和 胸 苷 ， 即 可 获 得 dhfr+并 能 表 达 外 源 基 因 的 克 隆 细 胞 系 。因 此 在 挑 选 表 达 外 源 基 因 的 阳 性 克 隆 细 胞 时 需 选 用 不 含 次 黄 嘌 呤 和 胸 苷 的 培 养基 。 另 外 ， 氨 甲喋呤 （ MTX） 选 择 压力可 使CHO/dhfr- 细 胞 的 外 源 基 因 的 拷贝数扩增并 得 到较高水平的 表 达 。 CHO-GS 细 胞 是 用 含 单抗蛋白等的 目的 基 因 和 谷氨 酰胺合 成 酶 (GS)基 因 标记 的 表 达 载体 ， 转染宿主细 胞 CHO， 再通过 L-氨 基 亚砜蛋氨 酸(methioninesu lphox imine ， MSX)等化 合 物 选 择 加 压促使GS 基 因 和 目的 蛋白基 因扩增， 筛...
