免疫标记：四大免疫标记原理介绍

为提高抗原和抗体检测的敏感性，将已知抗体或抗原标记上易显示的物质,通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。常用的标记物有酶、荧光素、放射性同位素、胶体金及电子致密物质等。这种抗原或抗体标记上显示物所进行的特异性反应称为免疫标记技术(immunolabellingtechnique)。免疫标记不仅大大提高了试验敏感性，若与光镜或电镜技术相结合，能对组织或细胞内的待测物质作精确定位，从而为基础与临床医学研究及诊断提供方便。免疫标记技术大致分为两大类：一类属于免疫组织化学技术(immunohistochemicaltechnique)，用于组织切片或其他标本中抗原的定位。另一类称为免疫测定(immunoassay)，用于液体标本中抗原或抗体的测定。—,免疫酶技术(immunoenzymatictechnique)最早应用的免疫酶技术是免疫酶组织化学染色，即用标记的抗体与标本中的抗原发生特异性结合，当加入酶的底物时，在酶的作用下经一系列生化反应产生有色物质，借助光镜作出定位判断。目前，应用最广泛的是酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)。该法特异性强，敏感性高，既可检测抗体，又能测定可溶性抗原。主要方法及操作要领见图 18.5，除了图示的两种方法外，还有抗原竞争法，现较少应用。ELISA 常采用的酶为辣根过氧化物酶(hosradishperoxidase,HRP)，其底物是二氨基苯胺(DAB)，底物被分解则呈棕褐色可目测或借助酶标仪比色。ELISA 为非均相免疫测定,另外还有均相法，在此免疫标记:不作介绍。由于酶免疫测定无需特殊仪器和试剂，且操作简便，利于普及。因此，在免疫标记技术中，该法应用最为广泛，并在原有方法基础上加以改良，使得众多新的，更敏感的方法应运而生。① 生物素-亲和素放大系统(biotin-avidinsystem，BAS)，建立于 70 年代后期，通过将酶标记在生物素或亲和素上，借助生物素与亲和素的高度亲力和生物素能与抗体结合的特点应用于 ELISA，显著提高了检测的敏感性。② 双表位 ELISA(two-siteELISA)，其方法同双抗体夹心法，只是将包被的抗体和酶标抗体换成针对两个不同抗原决定簇的单抗，用于检测单抗的亲和性及表位特异性，亦可用于标本中抗原的快速检测，即在试验时可将待测抗原与酶标单抗同时加入反应体系，减少检测步骤。③ 斑点免疫渗滤试验(dotimmunofiltrationassay，DIFA)，其原理与ELISA 相同，但以微孔膜(如硝酸纤维素膜、尼龙膜等)代替聚苯乙烯板作载体。试验时，将包被有抗原或抗体的微孔滤膜...