免疫组化 SP 法一． 实验原理SP 法是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质，分子量 47000.同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般 抗 原 抗 体 亲 和 力 的 一 百 万 倍 。 亲 和 素 是 一 个 碱 性 蛋 白 质（IP=10），经改造后可以转变为中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，IP=~，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。根据讨论，SP 大约可形成一百万个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所形成的复合物。大量的酶将保证 SP 具有很高的敏感性。SP 兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。二． 试剂来源三． 操作步骤1．载 玻 片 防 脱 片 处 理 ： 可 选 择 APES ， 捞 片 后 置 烤 箱60℃60min 以使切片紧密粘附。2．切片常规脱蜡3．30%过氧化氢 1 份+蒸馏水 10 份混合，室温 10min 以灭活内源性酶。蒸馏水洗 3 次4．热修复抗原：将切片浸入 构橼酸盐缓冲液（），高压3min，之后冷却 20min，再用 PBS 洗。5．滴加 5%BSA 封闭液，室温 10min，甩去多余液体，不洗6．滴加一抗（1:300）4℃过夜。PBS（~）洗 2min，共洗三次。7．滴加生物素化的山羊抗兔IgG（1:100），37℃30min。PBS（~）洗 2min，共洗 3 次。8．滴加试剂辣根酶标记链霉卵白素（1:100）PBS（~）洗5min，共 4 次。9．DAB 显色：使用 DAB 显色试剂盒(AR1022)。取 1ml 蒸馏水，加设计盒中 A,B,C 试剂各 1 滴，混匀后加至切片。室温显色，镜下控制反应时间，一般 5~30min 之间，蒸馏水洗涤。10．苏木素轻度复染 2min，脱水，透明，封片，显微镜观察
