选修 3 易考知识点背诵专题 1 基因工程基因工程的概念基因工程的别名 基因拼接技术或 DNA 重组技术操作环境 生物体外操作对象 基因操作水平 DNA 分子水平基本过程 剪切→ 拼接→导入→ 表达结果 产生人类需要的基因产物特点 打破种的界限,定向改造生物本质 基因重组（一)基因工程的基本工具1.“分子手术刀”-—限制性核酸内切酶（限制酶 ) （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有特异性。（3）结果：经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端.2。“分子缝合针”——DNA 连接酶 (1）两种 DNA 连接酶（E·coliDNA 连接酶和 T4—DNA 连接酶）的比较：① 相同点:都缝合磷酸二酯键。② 区别:E·coliDNA 连接酶来源于 T4噬菌体，只能将双链 DNA 片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而 T4DNA 连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低.(2)与 DNA 聚合酶作用的异同:DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA 连接酶是连接两个 DNA 片段的末端，形成磷酸二酯键。3.“分子运输车”--载体(1）载体具备的条件:① 能在受体细胞中复制并稳定保存 。 ② 具有一至多个限制酶切点 , 供外源 DNA 片段插入 。 ③ 具有标记基因，供重组 DNA 的鉴定和选择 . （2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状 DNA 分子。（3)其它载体： 噬菌体、动植物病毒（二)基因工程的基本操作程序第一步： 目的基因的猎取 1.目的基因是指：是人们所需要转移或改造的基因2。猎取目的基因的方法____________ _________________ _____________3.原核基因实行直接分离获得，真核基因是人工合成.人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。4。PCR 技术扩增目的基因（1）原理：DNA 双链复制 （2）过程：第一步：加热至 90～95℃DNA 解链;第二步：冷却到 55~60℃，引物结合到互补 DNA 链；第三步:加热至 70～75℃，热稳定 DNA 聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步:重组 DNA 分子 1。目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。2.组成：目的基因＋启动子＋...
