基因工程知识点全

第一章基因工程概述 1。什么是基因工程，基因工程的基本流程？基因工程(Genetic engineering）原称遗传工程。从狭义上讲，基因工程是指将一种或多种生物体（供体)的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体)内，使之根据人们的意愿遗传并表达出新的性状。因此，供体、受体和载体称为基因工程的三大要素.1。分离目的基因 2。限制酶切目的基因与载体3。目的基因和载体 DNA 在体外连接 4。将重组 DNA 分子转入合适的宿主细胞，进行扩增培育 5.选择、筛选含目的基因的克隆6。培育、观察目的基因的表达第二章基因工程的载体和工具酶 1。 基因工程载体必须满足哪些基本条件？具有对受体细胞的可转移性或亲和性。具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点.具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点。具有合适的筛选标记。分子量小，拷贝数多.具有安全性.2。 质粒载体有什么特征，有哪些主要类型？1、自主复制性2、可扩增性3、可转移性4、不相容性 主要类型有 1。克隆质粒 2。测序质粒 3。整合质粒 4.穿梭质粒 5。探针质粒 6。表达质粒3. 质粒的构建（1)删除不必要的 DNA 区域，尽量缩小质粒的分子量,以提高外源 DNA 片段的装载量。一般来说，大于 20Kb 的质粒很难导入受体细胞，而且极不稳定。(2）灭活某些质粒的编码基因，如促进质粒在细菌种间转移的 mob 基因,杜绝重组质粒扩散污染环境,保证 DNA 重组实验的安全，同时灭活那些对质粒复制产生负调控效应的基因，提高质粒的拷贝数(3）加入易于识别的选择标记基因，最好是双重或多重标记，便于检测含有重组质粒的受体细胞.（4）在选择性标记基因内引入具有多种限制性内切酶识别及切割位点的 DNA 序列，即 多克隆接头(Polylinker),便于多种外源基因的重组，同时删除重复的酶切位点，使其单一化，以便环状质粒分子经酶处理后，只在一处断裂，保证外源基因的准确插入。（5)根据外源基因克隆的不同要求，分别加装特别的基因表达调控元件.4. 什么是人工染色体载体？将细菌接合因子、酵母或人类染色体上的复制区、分配区、稳定区与质粒组装在一起,即可构成染色体载体5。 什么是穿梭载体？人工构建的、具有两种不同复制起点和选择标记、可以在两种不同的寄主细胞中存活和复制的载体。6.入-噬菌体载体及构建l—DNA 为线状双链 DNA 分子，长度为 48。5kb,在分子两端各有 12 个碱基的单链互补粘性末端.1 缩短长度提高外源 DNA 片段的...