1、细胞培育上清：即在 4℃下，首先 300×g 离心 10 min,吸取上清液，然后 2 000×g 离心 10 min；吸取上清液后，10 000×g 高速离心 30 min，吸取上清液；140000×g 超速离心 90 min；除去上清液，所获得的沉淀即为外泌体。用 PBS 缓冲液洗涤沉淀并重悬后，140 000×g 再次离心 90 min，100 μL PBS 缓冲液重悬沉淀，冻存于-80℃备用。2、将小鼠或人血收集在 1。5mL 管中，并使其在 37℃下凝聚 1 小时而不进行抗凝。 此后，将其以 2，000×g 离心持续 10 分钟获得血清。接着将血清以 3，000×g 离心 10 分钟. 将上清液以无菌PBS 以 1：1 的比例稀释并离心再次以 10,000×g 保持 30 分钟，然后以 200,000×g 进行 2 小时超速离心。 将颗粒在 a 中洗涤大量 PBS，通过 0。2-μm 注射器过滤器过滤,并以 200,000×g 离心1 小时，然后收集沉淀并重悬于 PBS 或 PBS 中用于后期功能或生化测定的培育基。为了从体液（例如尿液，支气管肺泡灌洗液，血清，血浆，肿瘤腹水）中纯化外泌体，只需通过常规方法收集液体即可。血浆用紫色的管子,EDTA 抗凝，血清的话不抗凝直接离心。在 4°C 下在玻璃瓶中储存长达 5 天，直至进行外泌体纯化.外泌体纯化的原理与从组织培育条件培育基开始时的原理相同,但由于某些流体的粘度，必须稀释它们，并增加离心的速度和长度.该方案已在作者的实验室中用于从人血浆中纯化外泌体（ Caby 等，2024)。基本方案 1 中指出的所有预处理也适用于该方案。材料液体(例如，血浆：通过 Ficoll 离心与血细胞分离；淋巴，血清,尿液，细支气管灌洗或肿瘤腹水）磷酸盐缓冲盐水(PBS;附录） 2A）冷冻离心机50 毫 升 聚 丙 烯 离 心 管 0 。 22 微 米 过 滤 装 置 （ 如Steritop，Millipore）超速离心机和固定角度或摆动式转子（见表3。22。1)适用于超速离心机转子的聚合物管或聚碳酸酯瓶（见表3。22） 0。1）注意：所有离心均应在 4℃下进行。1.用等体积的 PBS 稀释液体。将稀释的液体转移到 50 毫升管中。在2，000×g，4℃下离心 30 分钟.2。将上清液转移到超速离心管或瓶中，没有颗粒污染（参见基本方案 1，步骤 3 注释)。在 12,000×g,4℃下离心 45 分钟。3。小心地将上清液转移到超速离心管或瓶中（根据处理的液体体积,可参见表 3.22。1 中的管).在 110,000×g,4℃下离心 2 小时.4。将沉淀重悬于 1ml PBS 中，并将...
