专题１ 基因工程1。1 DNA 重组技术的基本工具１．基因工程又叫 DNA 重组技术 ，是指根据人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外 DNA 重组 和转基因等技术，给予生物以新的遗传特性，从而制造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品.操作水平是 DNA 分子水平 ，操作环境是在体外。２．“分子手术刀”──限制 性核酸内切 酶。这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。迄今已从近 300 种微生物中分离出了约 4000 种 限制酶。能够识别双链 DNA 分子的某种特定核苷酸序列；切开两个两个核苷酸之间的磷酸二酯键,形成黏性末端或平末端。３．“分子缝合针”──DNA 连接 酶。将切下来的 DNA 片段拼接成新的 DNA分子，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。种类：1)E.coli DNA 连接酶:只能将双链 DNA 片段互补的粘性末端之间连接起来 2）T4 DNA 连接酶：既可以“缝合”双链 DNA 片段互补的粘性末端,又可以“缝合"双链 DNA 片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低４．“分子运输车”──基因进入受体细胞的载体。作为载体的必要条件：能自我复制、有切割位点、有遗传标记基因等。载体的种类：细菌质粒、λ 噬 菌体的衍生物、动植物病毒1.2 基因工程的基本操作程序１．基因工程的基本操作步骤主要包括：目的基因的猎取；基因表达载体的构建;将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定.２。目的基因的猎取方法:从基因文库中猎取、利用 PCR 提取目的基因 、人工合成法。3.PCR 是一项在生物体外复制特定 DNA 片段的核酸合成 技术。原理 DNA 双链 复制。条件：模板 DNA ；RNA 引物 ；四种脱氧核苷酸；热稳定 DNA 聚合酶（ Taq 酶 ) 。方法：DNA 受热变性解旋为单链、冷却后 RNA 引物与单链相应互补序列结合、DNA 聚合酶作用下延伸合成互补链。4．基因表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在；可以遗传给下一代；使目的基因能够表达和发挥作用。5．基因表达的载体的组成目的基因 + 启动子 + 终止子 + 标记基因 6．转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 7。导入植物细胞:农杆菌转化法(表达载体导入农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞)这是双子叶植物和裸子植物中常用的基因转化方法；基因枪法，这是单子叶植物中常用的基因转化方法；花粉管通道法，这种方法十分简便经济,我国的转基因抗虫棉就是用这种方法得到的。8.导入动物细胞:显微注...
