绿色荧光蛋白基因的克隆和表达VIP专享

绿色荧光蛋白(GFP）基因的克隆和表达背景知识绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。当受到紫外或蓝光激发时,GFP 发射绿色荧光。它产生荧光无需底物或辅因子发色团是其蛋白质一级序列固有的。GFP 由 3 个外显子组成，长 2.6kb；GFP 是由 238 个氨基酸所组成的单体蛋白,相对分子质量为 27. 0kMr,其蛋白性质十分稳定，能耐受60℃处理.1996 年 GFP 的晶体结构被解出，蛋白质中央是一个圆柱形水桶样结构，长 420 nm，宽 240 nm，由 11 个围绕中心 α 螺旋的反平行 β 折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的，桶的顶部由 3 个短的垂直片段覆盖，底部由一个短的垂直片段覆盖,对荧光活性很重要的生色团则位于大空腔内.发色团是由其蛋白质内部第 65-67 位的 Ser—Tyr-Gly 自身环化和氧化形成.1996 年GFP 的晶体结构被解出，蛋白质中央是一个圆柱形水桶样结构，长420 nm，宽240 nm，由11 个围绕中心α螺旋的反平行β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的，桶的顶部由3 个短的垂直片段覆盖,底部由一个短的垂直片段覆盖，对荧光活性很重要的生色团则位于大空腔内。实验一 质粒 DNA 的分离与纯化一、实验目的掌握一种最常用的质粒 DNA 提取方法:碱裂解法。该法用于从小量培育物中抽提质粒DNA，比较方便、省时，提取的质粒 DNA 质量较高,可用于 DNA 的酶切、PCR 甚至测序。二、基本原理质粒是一类在细菌细胞内发现的独立于染色体外，能够自主复制的稳定的遗传单位 .迄今为止，从细菌中分离得到的质粒都是环型双链 DNA 分子，分子量范围从 1kb 到 200kb.质粒DNA 可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下又会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制,并通过细胞分裂传递到后代。在大多数情况下质粒 DNA 复制中的酶体系和细菌染色体复制时所用的酶是相同的.有些质粒复制受宿主细胞复制作用的严格限制,因此每个细胞中只含一个或几个拷贝,称为严谨型质粒,有的质粒的复制受宿主细胞的控制不严，称为松弛型质粒,它们在每个细胞中的数目可达 10-200 个拷贝。当宿主细胞的蛋白质合成受到抑制时(例如经氯霉素处理)，细菌染色体虽不再增加，但松弛型质粒 DNA 可继续被复制，以至每个细胞内的拷贝数可以增至一千到几千。质粒具有一定的生物功能，它们往往带有一些抗药标记,当质粒 DNA 用人...