DNA的粗提取与鉴定

DNA 的粗提取与鉴定DNA 的粗提取与鉴定 重点知识归纳及讲解 （一）实验原理 鸟类血液中红细胞有细胞核，细胞核内 DNA 与蛋白质结合成染色质。利用 DNA 在 0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，而蛋白质此时的溶解度高的特点，可以使 DNA 与蛋白质分离，形成沉淀析出，通过过滤，得到粗提取的滤出物 DNA。再利用 DNA 不溶于酒精，但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点，进一步提取出含杂质较少的 DNA。 利用 DNA 遇二苯胺（沸水浴）成蓝色的特性，可以鉴定提取的 DNA。 （二）实验材料（以鸡血为例） 鸡血细胞液：先配备 10%的柠檬酸钠溶液，按 180mL 新奇鸡血混合 100mL10%柠檬酸钠溶液的比例，立即将血液与柠檬酸钠充分混合，同时用玻璃棒搅拌以免凝血。然后，用离心机以 2000转/min 的速度离心 4min 后，用吸管除去离心管上清液，就可获得所需的鸡血细胞悬液。每组大约需要 5—10mL 鸡血细胞悬液。假如无离心机，可将与柠檬酸钠充分混合的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀后，也可获得所需的鸡血细胞悬液。 （三）试剂与仪器1、2mol/L 的 NaCl 溶液 称取 117g 的 NaCl，加蒸馏水至 1000mL，使之完全溶解，即可获得2mol/L 的 NaCl，须按此配方配备大量的 2mol/L 的 NaCl。2、二苯胺试剂 A 液——1.5g 二苯胺溶于 100mL 冰醋酸中，再加 1.5mL 浓硫酸，用棕色瓶保存。B 液——体积分数为 0.2%的乙醛溶液。实验前，将 0.1mL 的 B 液加入到 10mL 的 A 液中，现配现用。3、0.015mol/L 的 NaCl 溶液 称取 0.88g 氯化钠加蒸馏水至 1000mL，使之完全溶解。4、塑料杯和试管 DNA 易吸附在玻璃器皿上，用塑料杯和试管可减少提取过程中 DNA 的损失。 （四）实验方法与步骤1、提取细胞核物质 取 5—10mL 鸡血细胞悬液入烧杯中，加蒸馏水 20mL，同时，用玻璃棒沿一个方向快速充分搅拌，使血细胞过度吸水破裂，细胞核内物质释放出来，然后用纱布过滤取其滤液。 2、溶解核内的 DNA 在滤液中加入 2mol/L 的 NaCl40mL，并用玻璃棒沿一个方向搅拌 1min，核中 DNA 游离并充分溶解，染色质中的 DNA 和蛋白质分离。 3、析出 DNA 黏稠物 沿烧杯内壁缓慢加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌。由于溶液浓度的下降，使得 DNA 溶解度下降，蛋白质溶解度上升，DNA 析出成白色丝状黏稠物，当黏稠物不再增加时，停止加入蒸馏水。4、滤取 DNA 黏稠...